HBsAg突變?nèi)蚨嘀行难芯拷庾x媒體會(huì)”在滬舉行。臺(tái)灣大學(xué)醫(yī)學(xué)院高嘉宏教授、國(guó)家衛(wèi)計(jì)委臨床檢驗(yàn)中心王露楠教授探討了表面抗原（HBsAg）突變對(duì)臨床及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)帶來(lái)的挑戰(zhàn)和影響，HBsAg突變?nèi)蚨嘀行难芯控?fù)責(zé)人、羅氏診斷全球醫(yī)學(xué)科學(xué)事務(wù)部MikaelGencay博士則分享了該研究成果。

提高HBsAg突變檢出率

盡早發(fā)現(xiàn)隱匿性HBV感染患者

超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀DNA（cccDNA）是乙肝病毒（HBV）復(fù)制的初始模板。血清內(nèi)HBsAg的水平與cccDNA水平有一定相關(guān)性，HBsAg水平的下降不僅反映了cccDNA轉(zhuǎn)錄或mRNA轉(zhuǎn)譯的減少，同時(shí)也預(yù)示著宿主對(duì)HBV復(fù)制實(shí)現(xiàn)了免疫控制。因此，HBsAg水平是抗病毒治療成功的早期指標(biāo)，其下降速度和幅度可預(yù)測(cè)治療的長(zhǎng)期療效。研究數(shù)據(jù)顯示，對(duì)于低水平HBVDNA（＜2000IU/ml）的患者，HBsAg水平是一個(gè)重要風(fēng)險(xiǎn)因素。

盡管HBsAg具有重要臨床價(jià)值，但實(shí)際應(yīng)用中仍面臨諸多挑戰(zhàn)。由于HBV復(fù)制周期快且聚合酶易錯(cuò)配，在內(nèi)源性（宿主免疫清除）和外源性（疫苗和抗病毒藥物）的選擇性壓力作用下，天然產(chǎn)生或經(jīng)治療誘導(dǎo)的前S/S基因組區(qū)域突變?cè)诼訦BV感染患者中非常常見(jiàn)。HBsAg突變導(dǎo)致患者HBsAg檢測(cè)結(jié)果為陰性，但其血清和（或）肝臟中仍存在HBVDNA，這種情況稱為隱匿性HBV感染（OBI）。

高嘉宏教授指出：“OBI患者若作為獻(xiàn)血者或肝移植供體，將會(huì)對(duì)輸血和手術(shù)安全構(gòu)成重大隱患。同時(shí)，HBsAg突變會(huì)加速隱匿性乙型肝炎向肝硬化/肝癌進(jìn)展，并引發(fā)免疫抑制后的HBV再激活，導(dǎo)致檢測(cè)試劑漏檢、疫苗保護(hù)失敗、抗病毒治療失敗等。因此臨床需要更精準(zhǔn)的檢測(cè)，盡早發(fā)現(xiàn)這類患者。”

王露楠教授分享了一項(xiàng)針對(duì)中國(guó)獻(xiàn)血者隱匿性乙肝S基因相關(guān)突變的血清學(xué)特征研究。研究顯示，70.3%的樣本HBVDNA定量結(jié)果＜20IU/ml，僅有2.4%的樣本HBVDNA定量值＞200IU/ml；這些樣本中最常見(jiàn)的血清學(xué)模式是抗HBc/抗HBe同時(shí)陽(yáng)性和單獨(dú)抗HBc陽(yáng)性；OBI樣本中最常見(jiàn)的基因型為B和C；92.24%的OBI樣本發(fā)生了突變，高于HBsAg陽(yáng)性菌株的突變情況。

王露楠教授表示：“OBI的發(fā)生與S基因突變有關(guān)，且OBI患者的突變率更高，這對(duì)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力提出了新的挑戰(zhàn)。血清學(xué)檢測(cè)試劑的設(shè)計(jì)不僅要滿足靈敏度和特異性，還要具備HBsAg突變檢測(cè)的能力。傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）的突變檢測(cè)能力有待提高。目前結(jié)果顯示，電化學(xué)發(fā)光法（ECL）具有優(yōu)異的HBsAg突變檢出能力。”

真實(shí)臨床患者樣本研究力證

Elecsys?HBsAg檢測(cè)性能

會(huì)上，MikaelGencay博士介紹了HBsAg突變?nèi)蚨嘀行难芯砍晒?。該研究首次采用真?shí)臨床患者樣本，納入1553例來(lái)自非洲、亞洲、歐洲、美洲等全球不同流行地區(qū)且涵蓋各種重要基因型的HBV感染患者樣本，包括來(lái)自中國(guó)的407例HBV感染患者樣本。

研究發(fā)現(xiàn)，超過(guò)70%的樣本發(fā)生了HBsAg突變，且全球范圍內(nèi)不同流行地區(qū)及不同基因型中總體突變率無(wú)顯著差異。其中，大部分中國(guó)患者樣本為基因型C，而多位點(diǎn)突變頻率在基因型C感染的人群中更高。在中國(guó)樣本中，還發(fā)現(xiàn)了136種特有的突變（全球共345種突變），10余種新的突變體（全球共62種）；在超過(guò)30%的中國(guó)患者樣本中發(fā)現(xiàn)了47種位于“a”決定簇區(qū)域的特有突變，這是對(duì)于診斷及臨床都非常重要的區(qū)域，可能與宿主免疫反應(yīng)差有關(guān)，也可導(dǎo)致慢性HBV感染，還可導(dǎo)致假陰性診斷結(jié)果。此外，與G145R突變相關(guān)的疫苗及診斷逃逸在中國(guó)樣本中的發(fā)生比例更高，為4%，而全球比例為2%。

研究還對(duì)4種HBsAg商業(yè)試劑（羅氏診斷Elecsys?HBsAgⅡ免疫檢測(cè)、兩種基于磁珠顆粒的HBsAg免疫檢測(cè)、HBsAgELISA檢測(cè)）進(jìn)行了性能比較分析。Elecsys?HBsAgⅡ的靈敏度最高，達(dá)到99.94%；并成功識(shí)別出研究中所有（含突變體）的真實(shí)臨床患者樣本，證實(shí)了HBsAg突變對(duì)該試劑的檢測(cè)性能沒(méi)有影響。MikaelGencay博士表示：“研究證明，HBsAg突變?cè)贖BV感染患者中非常常見(jiàn)，發(fā)生率比之前所報(bào)道的數(shù)據(jù)高出3倍。對(duì)存在大量HBsAg突變的患者，使用Elecsys?HBsAgⅡ免疫檢測(cè)進(jìn)行管理是非常安全、可靠的。”

Elecsys?HBsAgⅡ定性和定量檢測(cè)試劑均采用獨(dú)特的抗原抗體反應(yīng)體系設(shè)計(jì)，并使用3種單克隆抗體和1種多克隆抗體的組合，能檢測(cè)到目前所有已知的HBV血清型，并有利于提高HBsAg突變的檢出能力，對(duì)于HBV感染的篩查、診斷和監(jiān)測(cè)具有重要價(jià)值。