隨著時(shí)代的進(jìn)步，多種新型的測(cè)量?jī)x器的應(yīng)用也使得對(duì)粒度的把握更加準(zhǔn)確，如激光衍射粒度分析儀、庫(kù)爾特計(jì)數(shù)儀、顆粒圖像處理儀器及離心沉降儀等等。不同設(shè)備的測(cè)量原理不同，導(dǎo)致結(jié)果會(huì)有所差異。例如沉降儀所依據(jù)的理論是Stokes公式中球形顆粒的沉降速率與粒徑之間的關(guān)系，而對(duì)不規(guī)則顆粒，二者之間的關(guān)系是未知的，為此沉降儀所測(cè)得的粒徑相當(dāng)于某一球體的大小，稱之為沉降速度粒徑；庫(kù)爾特計(jì)數(shù)器得到的稱之為等效電阻粒徑；激光粒度儀給出的粒徑稱之為等效散射光粒徑。因此，只有顆粒為完整的球形時(shí)，所有設(shè)備測(cè)得結(jié)果才有可能是相同的。

　　隨著當(dāng)前對(duì)藥品質(zhì)量的要求越來越高，口服固體API和輔料的粒度分布影響著藥物的溶出速率甚至是體內(nèi)吸收，無論是制?；蛘叻勰┲眽汗に嚩夹枰獙?duì)粉體顆粒的粒度分布有一個(gè)嚴(yán)格控制范圍，粒度分布直接影響顆粒的流動(dòng)性、可壓性甚至含量均勻度等等。本文將對(duì)激光衍射粒度儀測(cè)量方法的開發(fā)進(jìn)行一個(gè)簡(jiǎn)單的介紹。

　　激光衍射法精密度、準(zhǔn)確度執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)

　　簡(jiǎn)單的說，激光衍射粒度儀主要是利用了光的散射原理測(cè)量粒徑，是基于顆粒體積的計(jì)算技術(shù)，將不規(guī)則顆粒假設(shè)為等體積球模型。顆粒的粒度越小，散射角越大。

　　2010版和2015版《中國(guó)藥典》粒度和粒度分布測(cè)定法均收錄了第三法（光散射法），制劑通則僅對(duì)儀器的一般要求和測(cè)定法進(jìn)行了簡(jiǎn)單介紹，目前CFDA尚無應(yīng)用第三法進(jìn)行API粒度分析方法開發(fā)和驗(yàn)證的相關(guān)指導(dǎo)原則。USP的?429?LIGHTDIFFRACTIONMEASUREMENTOFPARTICLESIZE和EP的2.9.31.PARTICLESIZEANALYSISBYLASERLIGHTDIFFRACTION均是基于ISO標(biāo)準(zhǔn)13320-1(1999)和9276-1(1998)開發(fā)的，國(guó)內(nèi)有相應(yīng)的中文版GB/T19077粒度分析-激光衍射法和GB/T15445粒度分析結(jié)果的表述。ISO13320現(xiàn)行版本已經(jīng)更新到2009年版了，而最新版的USP和EP還在沿用1999年版?，F(xiàn)行版本ISO13320:2009IDT最大的改變就是增加了一些為準(zhǔn)確測(cè)量而提出的試驗(yàn)方法與過程。下面我們來看下儀器校驗(yàn)精密度和準(zhǔn)確度的主要差別。

　　標(biāo)準(zhǔn)

　　USP

　　EP

　　CP

　　ISO2009

　　精

　　密

　　度

　　標(biāo)準(zhǔn)粒子

　　樣品

　　樣品

　　粒子最大粒徑與最小粒徑比約10:1

　　x90/x10=1.5-10

　　測(cè)量次數(shù)

　　6

　　6

　　5

　　5

　　D（0.5）

　　RSD<10%

　　RSD<10%

　　RSD<3%

　　RSD<3%

　　D（0.1）

　　D（0.9）

　　RSD<15%

　　RSD<15%

　　RSD<5%

　　RSD<5%

　　粒徑小于10μm

　　RSD翻倍

　　RSD翻倍

　　RSD翻倍

　　RSD翻倍

　　準(zhǔn)

　　確

　　度

　　標(biāo)準(zhǔn)粒子

　　樣品

　　樣品

　　粒子最大粒徑與最小粒徑比約10:1

　　x90/x10=1.5-10

　　測(cè)量次數(shù)

　　3

　　3

　　5

　　3

　　D（0.5）

　　RSD<10%

　　RSD<10%

　　RSD<3%

　　RSD<3%

　　D（0.1）

　　D（0.9）

　　RSD<15%

　　RSD<15%

　　RSD<5%

　　RSD<5%

　　粒徑小于10μm

　　RSD翻倍

　　RSD翻倍

　　RSD翻倍

　　RSD翻倍

　　對(duì)比各指導(dǎo)原則，我們?cè)趯?shí)際應(yīng)用時(shí)可采用更為嚴(yán)格CP或ISO2009對(duì)儀器的緊密度和準(zhǔn)確度進(jìn)行校驗(yàn)。通常在實(shí)際研發(fā)過程中，API或者粉末固體的粒度分布是控制在某一特定范圍內(nèi)，因此開發(fā)粉體測(cè)量方法時(shí)，選擇USP或者EP作為一個(gè)接受標(biāo)準(zhǔn)。

　　粒度分析方法的開發(fā)-干法

　　穩(wěn)定性對(duì)于一個(gè)測(cè)量方法的重要性不言而喻，而影響干法和濕法的影響因素各有不同。無論是使用干法或者濕法，取樣的代表性直接影響著測(cè)量結(jié)果。個(gè)人覺得取樣方法可參考混合均勻度的取樣方式(BU混合/CU含量均勻度該怎么取樣，判斷合格?)。若樣品均適合干法或者濕法測(cè)量，原則上結(jié)果應(yīng)該是相似的。

　　對(duì)于干法而言，分散介質(zhì)一般為空氣，則首先需要考慮高壓分散氣體的潔凈度、含水量等。接下來就是我們?cè)陂_發(fā)方法中需要考察的參數(shù)：分散壓力、進(jìn)料頻率等。當(dāng)然如需非常精確的測(cè)定，還需要知道該物質(zhì)的折射率，可以查閱文獻(xiàn)、ISO13320及使用常規(guī)的光學(xué)儀器如阿貝折射儀等測(cè)量。若對(duì)精度沒有特別高的要求，一般可選儀器默認(rèn)值。

　　分散氣壓：決定樣品的分散程度，也是干法測(cè)量中一個(gè)關(guān)鍵參數(shù)。分散氣壓過小，樣品沒有充分分散，測(cè)定數(shù)據(jù)偏大；分散氣壓過大，可能造成對(duì)樣品的破壞（氣流粉碎效應(yīng)）。以某粉末的粒度測(cè)試結(jié)果為例，平行測(cè)量3次結(jié)果見下圖：結(jié)合可接受標(biāo)準(zhǔn)，即可選300Kpa（平臺(tái)）作為分散氣壓，大于350Kpa出現(xiàn)氣流粉碎效應(yīng)。

　　進(jìn)料頻率：需根據(jù)粉體顆粒的流動(dòng)性來調(diào)節(jié)，在分散氣壓確定的情況下，可結(jié)合遮光率的結(jié)果來反饋，遮光率太高在系統(tǒng)內(nèi)可能發(fā)生重復(fù)散射現(xiàn)象，太低則噪音信號(hào)會(huì)淹沒樣品信號(hào)。一般情況下，細(xì)分遮光率0.5~3%，粗粉可放寬到0.5~6%。

　　這里以另一粉末的粒度測(cè)試結(jié)果為例，分別考察30%、40%、50%、60%進(jìn)樣速率，平行測(cè)量3次結(jié)果見下圖：結(jié)合可接受標(biāo)準(zhǔn)，遮光度均符合要求，各測(cè)量組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，因此選擇RSD最小的50%作為進(jìn)樣速率。

　　中間精密度：在確定好分散氣壓和進(jìn)料頻率后，需要對(duì)方法的重現(xiàn)性或者說考察一下方法的中間精密度，通常是兩名操作人員對(duì)既定方法分別進(jìn)行6次測(cè)定，計(jì)算12次測(cè)量結(jié)果的RSD。若RSD在可接受標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，既可以將該方法確定為干法測(cè)量的SOP。

　　粒度分析方法的開發(fā)-濕法

　　相比干法，濕法在分散這一步驟需要考慮的因素相對(duì)較多，濕法相比干法多了分散介質(zhì)的折射率，可通過溶劑的供應(yīng)商或者相關(guān)的文獻(xiàn)查詢。濕法是一個(gè)循環(huán)連續(xù)的測(cè)定過程，樣品的加入量一般是隨著顆粒粒徑的增大而增大，也可通過遮光比這一參數(shù)控制。通常，對(duì)于非常細(xì)粉，遮光率<5%，細(xì)粉5~10%，粗粉10~15%，多分散體系15~20%。另外如分散介質(zhì)的選擇，分散方式的考察將是方法開發(fā)的主要考察內(nèi)容。對(duì)于分散介質(zhì)要求無雜質(zhì)，光學(xué)性質(zhì)均衡不與樣品發(fā)生物理、化學(xué)變化良好的潤(rùn)濕作用良好的溶劑，這樣才能使得分散體系均勻、易于進(jìn)樣。一般常用的介質(zhì)為去離子水、乙醇、異丙醇等。

　　超聲時(shí)間：對(duì)于細(xì)粉，由于表明張力或者靜電等原因會(huì)在分散介質(zhì)中發(fā)生二次團(tuán)聚現(xiàn)象，這時(shí)就需要通過超聲、加入表面活性活性劑或者穩(wěn)定劑等方式改善分散體系，需注意的是在分散過程中避免氣泡的產(chǎn)生。超聲的時(shí)間一般與顆粒大小有關(guān)，隨著顆粒增大而時(shí)間延長(zhǎng)。表活的加入主要是為了增加潤(rùn)濕性，實(shí)驗(yàn)室常用的吐溫、SDS等均可使用，一般濃度為千分之五。另外也可以適當(dāng)加入一些穩(wěn)定劑如六偏磷酸鈉、焦磷酸鈉等，增加顆粒的Zeta電位。

　　對(duì)于是否分散均勻，直觀可以通過顯微鏡觀察。同時(shí)也可以實(shí)測(cè)粒徑數(shù)據(jù)變化獲得。處理方式為超聲，結(jié)果如下圖：結(jié)果表明隨著超聲時(shí)間的延長(zhǎng)，最終粒徑的變化趨于平緩且RSD滿足標(biāo)準(zhǔn)，表明測(cè)得結(jié)果可接受。

　　攪拌轉(zhuǎn)速：對(duì)于樣品池中攪拌速度的考察，同理也是結(jié)合粒度的變化及RSD的范圍，需要注意的是篩選一個(gè)適宜的轉(zhuǎn)速將大顆粒懸浮起來。如圖，可選擇2500rpm為分散速率。

　　小結(jié)

　　無論干法或者濕法，二者都是對(duì)影響分散狀態(tài)的參數(shù)進(jìn)行考察，不同的是干法重點(diǎn)考察分散氣壓，而濕法則需考慮分散介質(zhì)和分散方式。我們也需根據(jù)粉末或者顆粒的性質(zhì)選擇適宜的測(cè)量方法。