無菌制劑，絕對是高風(fēng)險(xiǎn)中的高風(fēng)險(xiǎn)，無菌保障是第一位，而培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)則是保障無菌必須要做的，試驗(yàn)通不過，就不能做無菌產(chǎn)品，這是底限。哪些劑型哪些產(chǎn)品要做培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)？一是無菌原料（我沒接觸過，在此飄過），二是無菌制劑。菌制劑包括無菌分裝的粉針劑（青霉素、頭孢菌素、非青非頭產(chǎn)品）、無菌凍干劑（指除菌過濾產(chǎn)品）、生物制品無菌制劑、非終端滅菌的中藥注射劑等，均需要每半年進(jìn)行一次培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)。

　　一、模擬灌裝試驗(yàn)指南征求稿

　　最近網(wǎng)上流傳SFDA查驗(yàn)中心2016年7月發(fā)布了《無菌制劑培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)指南》（征求意見稿），大致內(nèi)容概述如下：

　　1、目的：充分評價(jià)藥品生產(chǎn)企業(yè)的無菌操作水平。

　　2、適用范圍：采用無菌生產(chǎn)工藝生產(chǎn)的無菌制劑。

　　3、定義：模擬無菌操作全過程，以評價(jià)無菌保證水平。

　　4、原則：模擬試驗(yàn)的前提是GMP合規(guī)；首次或變更后需要對無菌生產(chǎn)過程風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)進(jìn)行事先評估，評估結(jié)果在試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)中予以考慮；關(guān)注開放操作、人工干預(yù)等高風(fēng)險(xiǎn)過程；多產(chǎn)品多規(guī)格和顯著差異的無菌工藝過程逐一開展模擬試驗(yàn)。

　　5、模擬范圍：從第一步無菌操作開始，直至無菌產(chǎn)品完全密封結(jié)束。

　　6、方案設(shè)計(jì)及實(shí)施過程：

　　6.1前提條件是，廠房設(shè)施、文件、人員更衣及培訓(xùn)、密封性驗(yàn)證等均已完成；

　　6.2方案設(shè)計(jì)，應(yīng)重點(diǎn)評估無菌操作的高風(fēng)險(xiǎn)過程，重點(diǎn)考察有人員參與的關(guān)健操作，證實(shí)無菌操作人員滿足無菌生產(chǎn)要求。

　　6.3培養(yǎng)基：一般選廣譜的胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB），厭氧產(chǎn)品可用硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基（FTM），如為動(dòng)物來源培養(yǎng)基，需提供無BSE（可傳染性海綿腦?。?TSE（瘋牛?。┳C明，也可先植物來源的培養(yǎng)基。

　　6.3.1培養(yǎng)基促生長能力試驗(yàn)，包括白色念珠菌（CMCC98001）、黑曲霉（CMCC98003）、枯草芽孢桿菌（CMCC63501）、金黃色葡萄球菌（CMCC26003）、銅綠假單胞菌（CMCC10104）、生孢梭菌（CMCC64941）六種標(biāo)準(zhǔn)菌株，還應(yīng)考慮加入環(huán)境和無菌檢查中發(fā)現(xiàn)的微生物，且接種量應(yīng)控制在10CFU-100CFU/灌裝單位，5天的促生長試驗(yàn)，應(yīng)證明培養(yǎng)基能夠支持微生物的生長。

　　6.3.2培養(yǎng)基配制：應(yīng)按照培養(yǎng)基生產(chǎn)商提供的配方配制培養(yǎng)基，并考慮降低非無菌培養(yǎng)基中細(xì)菌和霉菌生長的風(fēng)險(xiǎn)，以避免微生物生長導(dǎo)致培養(yǎng)基過濾性能降低。

　　6.3.3培養(yǎng)基的除菌與滅菌：除菌過濾，其可靠性是通過專門的除菌過濾挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的，無法通過培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)的結(jié)果證實(shí)。濕熱滅菌，要避免過度滅菌，可采用濕熱滅菌與除菌過濾聯(lián)合使用的方式，但都應(yīng)進(jìn)行促生長性能檢查。輻照滅菌，可避免支原體污染風(fēng)險(xiǎn)，常與除菌過濾聯(lián)合使用。

　　6.4灌裝量：灌裝量通常應(yīng)能達(dá)到容器體積的1/3～1/2，即可保證產(chǎn)品通過倒置和旋轉(zhuǎn)接觸到所有內(nèi)表面并有足夠的氧氣支持微生物的生長，以利于對培養(yǎng)基的觀察。企業(yè)應(yīng)基于風(fēng)險(xiǎn)評估的原則對所設(shè)計(jì)的灌裝數(shù)量、持續(xù)時(shí)間、模擬方式、預(yù)期收率作出合理說明。對大規(guī)模生產(chǎn)，即產(chǎn)品的生產(chǎn)批量大于10000支，最低模擬灌裝數(shù)量應(yīng)不低于10000支，且不應(yīng)低于產(chǎn)品實(shí)際生產(chǎn)批量的10%。

　　6.5最差條件的選擇（關(guān)鍵點(diǎn)）：應(yīng)基于風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)并結(jié)合無菌生產(chǎn)工藝、設(shè)備裝備水平、人員數(shù)量和干預(yù)等因素來設(shè)計(jì)模擬試驗(yàn)最差條件。值得注意的是最差條件并不是指人為創(chuàng)造的超出允許范圍的生產(chǎn)狀況和環(huán)境，比如故意做AB級(jí)停電的無菌挑戰(zhàn)是不能接受的。包括人員：應(yīng)包括日常參與到無菌生產(chǎn)的全部人員，如生產(chǎn)操作、取樣、環(huán)境監(jiān)測和設(shè)備設(shè)施維護(hù)人員，同時(shí)應(yīng)考慮以上人員交叉作業(yè)、班次輪換、更衣、夜班疲勞狀態(tài)等因素。工藝時(shí)間：應(yīng)適當(dāng)考慮模擬實(shí)際生產(chǎn)操作過程中房間、設(shè)備、物料消毒或滅菌后放置的最長時(shí)間及最長的工藝保留時(shí)限等。灌裝速度：采用最慢的灌裝速度、最大的容器用以模擬最長暴露時(shí)間，也可采用最快的灌裝速度、最小的容器用以模擬最大操作強(qiáng)度/難度。環(huán)境：模擬試驗(yàn)挑戰(zhàn)的最差環(huán)境應(yīng)考慮選擇單批產(chǎn)品無菌生產(chǎn)周期末端、間歇式生產(chǎn)的空調(diào)系統(tǒng)重新開啟后或連續(xù)生產(chǎn)期間周期性滅菌最長的時(shí)間間隔。

　　6.6接下來是“干預(yù)”：干預(yù)可分為固有的干預(yù)和糾正性干預(yù)。固有干預(yù)是指常規(guī)和有計(jì)劃的無菌操作，如裝載膠塞，環(huán)境監(jiān)控，設(shè)備安裝等；糾正性干預(yù)則是指對無菌生產(chǎn)過程的糾正或調(diào)整，如生產(chǎn)過程中清除破碎的瓶子，排除卡住的膠塞，更換部件、設(shè)備故障排除等。

　　6.7容器規(guī)格與容器閉封組合：一般選擇應(yīng)對最小和最大尺寸的容器進(jìn)行培養(yǎng)基灌裝模擬試驗(yàn)，通常采用透明的容器代替不透明或棕色的容器，以保證識(shí)別受污染模擬產(chǎn)品的能力。

　　6.8培養(yǎng)前的容器檢查：模擬試驗(yàn)中完整性缺陷產(chǎn)品的剔除工藝應(yīng)采用日常生產(chǎn)的剔除工藝，除完整性缺陷的產(chǎn)品外，其他外觀缺陷、灌裝量異常的模擬產(chǎn)品也應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)并用于評估污染率。

　　6.9培養(yǎng)條件：培養(yǎng)前，應(yīng)對模擬灌裝產(chǎn)品進(jìn)行顛倒、輕搖以使培養(yǎng)基接觸所有內(nèi)表面。培養(yǎng)時(shí)間至少14天，一般采用先在20-25℃最少培養(yǎng)7天，然后在30-35℃的范圍繼續(xù)培養(yǎng)7天。也可采用單一的20-35℃的培養(yǎng)條件，但應(yīng)有相關(guān)的數(shù)據(jù)證明培養(yǎng)條件有利于微生物的生長。

　　6.10培養(yǎng)后的檢查：應(yīng)對所有模擬灌裝產(chǎn)品逐支進(jìn)行無菌性檢查，在培養(yǎng)期間定期觀察培養(yǎng)基的培養(yǎng)情況，如在培養(yǎng)期間發(fā)現(xiàn)陽性樣品，應(yīng)做標(biāo)記并立即移出培養(yǎng)箱（室）。

　　6.11計(jì)數(shù)與數(shù)額平衡：對各個(gè)階段的模擬灌裝產(chǎn)品進(jìn)行準(zhǔn)確計(jì)數(shù)：包括灌裝、培養(yǎng)前檢查、培養(yǎng)后檢查的數(shù)量等。

　　6.12環(huán)境及監(jiān)控：采樣人員無菌操作能力及環(huán)境監(jiān)測對無菌灌裝的影響都應(yīng)在培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)中充分評估。

　　6.13人員因素：所有被授權(quán)在生產(chǎn)時(shí)進(jìn)入無菌灌裝間的人員，包括觀察人員和維修人員，每年至少參加一次成功的培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)，方可參與正常生產(chǎn)的無菌操作，應(yīng)保留人員參與相關(guān)模擬試驗(yàn)的記錄。

　　6.14方案的實(shí)施：模擬試驗(yàn)的結(jié)果、評估和結(jié)論應(yīng)形成書面報(bào)告并經(jīng)質(zhì)量管理部門批準(zhǔn)，根據(jù)實(shí)施記錄，為通過模擬驗(yàn)證的人員頒發(fā)確認(rèn)書并規(guī)定有效期限。

　　7、可接受標(biāo)準(zhǔn)與結(jié)果判斷：培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)可接受標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)當(dāng)遵循現(xiàn)行GMP無菌附錄中的有關(guān)規(guī)定。應(yīng)基于風(fēng)險(xiǎn)評估的原則制定科學(xué)合理的內(nèi)控限度；出現(xiàn)任何陽性均應(yīng)進(jìn)行徹底、規(guī)范的調(diào)查；在科學(xué)評估的基礎(chǔ)上采取適當(dāng)?shù)募m偏措施。如果連續(xù)進(jìn)行的模擬灌裝批中反復(fù)出現(xiàn)陽性意味著無菌生產(chǎn)工藝存在系統(tǒng)性問題，必須得到有效解決。

　　8、污染調(diào)查及糾正措施：

　　8.1不管批量有多大，只要無菌工藝驗(yàn)證存在污染，意味著無菌保證可能存在問題，發(fā)現(xiàn)任何污染樣品均應(yīng)進(jìn)行調(diào)查，應(yīng)利用一切可能的方法調(diào)查污染的來源，污染調(diào)查流程及方法應(yīng)在方案中明確規(guī)定。模擬灌裝中出現(xiàn)任何數(shù)量的污染都必須視為偏差并徹底調(diào)查。分離到的污染微生物應(yīng)鑒別到種屬，鑒別結(jié)果應(yīng)與本次試驗(yàn)過程所有微生物檢測結(jié)果及企業(yè)微生物菌種庫進(jìn)行對比，為查找污染途徑提供可能的依據(jù)。調(diào)查的關(guān)鍵是找到污染的來源，結(jié)合調(diào)查需要，必要時(shí)應(yīng)制定完整的取樣和微生物鑒別計(jì)劃，調(diào)查過程應(yīng)有記錄并歸檔。

　　8.2如調(diào)查找到指定的原因，應(yīng)制定糾正預(yù)防措施，并再次進(jìn)行模擬試驗(yàn)，以證明措施的有效性。如調(diào)查無指定原因，應(yīng)對生產(chǎn)工藝過程的無菌控制開展系統(tǒng)性評估，同時(shí)應(yīng)適當(dāng)增加試驗(yàn)批次。

　　8.3調(diào)查結(jié)果應(yīng)形成書面報(bào)告并得到質(zhì)量管理部門的批準(zhǔn)。

　　9、試驗(yàn)周期及再驗(yàn)證：

　　9.1新建無菌生產(chǎn)線，在正式投產(chǎn)之前，每班次應(yīng)當(dāng)連續(xù)進(jìn)行3次合格試驗(yàn)，在無菌生產(chǎn)工藝中一條生產(chǎn)線存在多臺(tái)相同功能設(shè)備時(shí)，應(yīng)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評估決定相關(guān)驗(yàn)證次數(shù)，但每臺(tái)設(shè)備應(yīng)至少進(jìn)行一次模擬試驗(yàn)。

　　9.2正常生產(chǎn)期間應(yīng)當(dāng)按照生產(chǎn)工藝每條生產(chǎn)線每班次每半年進(jìn)行一次，每次至少一批。對于設(shè)備因其它原因停產(chǎn)一定周期的生產(chǎn)線，在恢復(fù)正式生產(chǎn)前應(yīng)考慮進(jìn)行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)

　　9.3空氣凈化系統(tǒng)、生產(chǎn)用設(shè)備、無菌生產(chǎn)工藝及人員重大變更或設(shè)備的重大維修后，應(yīng)當(dāng)進(jìn)行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)。

　　9.4企業(yè)應(yīng)充分評估生產(chǎn)線的風(fēng)險(xiǎn)，在發(fā)現(xiàn)設(shè)施、人員、環(huán)境或工藝的持續(xù)監(jiān)測出現(xiàn)不良趨勢或無菌不合格時(shí)，也應(yīng)考慮再次進(jìn)行模擬試驗(yàn)。

　　二、模擬灌裝試驗(yàn)的實(shí)例

　　列舉一個(gè)廠凍干針劑例子，方案介紹如下：

　　1、標(biāo)題：XXX凍干粉針劑生產(chǎn)線培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)驗(yàn)證方案

　　2、簽批：生產(chǎn)起草，由技術(shù)、檢驗(yàn)、驗(yàn)證、QA等部門審核，最終QP批準(zhǔn)。

　　3、修訂歷史記錄：版本、修訂日期、修訂/更改要求的原因、修訂人等。

　　4、目錄：有20個(gè)項(xiàng)目，列有內(nèi)容標(biāo)題和頁碼。

　　5、正文

　　5.1目的：

　　根據(jù)GMP規(guī)范要求和廠驗(yàn)證主計(jì)劃要求，特?cái)M定本方案，對該生產(chǎn)線的無菌生產(chǎn)工藝進(jìn)行再驗(yàn)證，通過此次驗(yàn)證確保該凍干劑生產(chǎn)線無菌保證水平。

　　本方案盡量使用與實(shí)際生產(chǎn)工藝相同的條件和操作方法，同時(shí)模擬最差灌裝工況，向注射劑瓶內(nèi)灌裝經(jīng)除菌過濾器過濾的胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基（TSBmedium），然后半壓塞、模擬凍干、壓塞、軋蓋；將此制品在適當(dāng)條件下培養(yǎng)檢查其受微生物污染的程度，以確認(rèn)無菌生產(chǎn)工藝過程的可靠性，并確認(rèn)所采用的各種方法和規(guī)程防止微生物污染的水平能達(dá)到可接受的合格標(biāo)準(zhǔn)。

　　通過模擬灌裝試驗(yàn)確認(rèn)以下可能導(dǎo)致產(chǎn)品微生物污染的工況對產(chǎn)品無菌性的影響：

　　灌裝間的潔凈環(huán)境

　　灌裝過程中直接與產(chǎn)品接觸的器具及物料的使用前的儲(chǔ)存時(shí)間

　　在RABS層流保護(hù)下，膠塞、瓶子暴露4小時(shí)后的無菌性

　　無菌生產(chǎn)潔凈區(qū)操作人員數(shù)量及無菌操作技能

　　灌裝過程持續(xù)的時(shí)間

　　灌裝人員的交接班過程

　　操作人員通過RABS手套對灌裝、軋蓋過程進(jìn)行干擾的次數(shù)和時(shí)間（未打開門）

　　操作人員打開RABS門對灌裝、軋蓋過程進(jìn)行干擾的次數(shù)和時(shí)間（打開門）

　　環(huán)境監(jiān)測和取樣過程

　　使用無菌風(fēng)險(xiǎn)最高的板層模擬培養(yǎng)基凍干操作

　　灌裝過程中設(shè)備故障的維修過程

　　凍干機(jī)滅菌后最長使用時(shí)間

　　出箱持續(xù)時(shí)間

　　軋蓋持續(xù)時(shí)間

　　5.2概述：其中工藝描述包括批量、產(chǎn)品包裝形式、包裝組件規(guī)格、生產(chǎn)線速度（模擬灌裝的高、中、低速）、洗瓶、配料、灌裝、凍干、軋蓋的工藝過程描述；相對上次是否發(fā)生變更及風(fēng)險(xiǎn)評估。畫出凍干粉針劑的生產(chǎn)線工藝流程圖。

　　5.3參考文件：如SFDA的藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范--無菌附錄（2010年）、藥品GMP指南--無菌藥品（2010年）、藥品生產(chǎn)驗(yàn)證指南（2003版）、EU的GuidetoGoodManufacturingPracticeforMedicinalProducts（01版）、USA的ValidationofPharmaceuticalProcesses（3rdEdition,319-326）、PDA的TechnicalReportNo.22rocessSimulationTestingforAsepticallyFilledProducts（1996,50,S1）。

　　5.4縮寫與定義：PQ、PV、QA、QP、CGMP等。

　　5.5職責(zé)：生產(chǎn)、技術(shù)、質(zhì)量控制、質(zhì)量保證等在本培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)中的分工和職責(zé)。如質(zhì)量管理負(fù)責(zé)人職責(zé)為最終批準(zhǔn)驗(yàn)證過程中的偏差或變更；最終批準(zhǔn)所有驗(yàn)證方案；

　　最終批準(zhǔn)所有驗(yàn)證總結(jié)報(bào)告。

　　5.6實(shí)施和文件要求：按《驗(yàn)證實(shí)施和記錄標(biāo)準(zhǔn)操作程序》實(shí)施本項(xiàng)驗(yàn)證，收集和記錄相關(guān)信息和驗(yàn)證結(jié)果。實(shí)施過程中如出現(xiàn)偏差或變更，或出現(xiàn)需要對方案進(jìn)行修訂的情況，填寫“偏差表格”或“驗(yàn)證方案修訂申請表”，并在“驗(yàn)證方案修訂記錄表”中記錄本項(xiàng)驗(yàn)證實(shí)施過程中發(fā)生的所有方案修訂。

　　5.7培訓(xùn)確認(rèn)/簽名表：記錄所有實(shí)施本方案相關(guān)工作的人員，確認(rèn)所有人員在方案實(shí)施前均已接受適宜的培訓(xùn)。所有實(shí)施本方案的人員，均須針對本方案和相應(yīng)方法及相關(guān)SOP進(jìn)行培訓(xùn)，以正確實(shí)施和記錄相關(guān)工作。在實(shí)施方案前，在下表中登記姓名、部門名稱，并簽名和簽署日期。

　　5.8驗(yàn)證前確認(rèn)：一是文件：模擬灌裝涉及的操作均有規(guī)程指導(dǎo)，包括名稱，編號(hào)，版本號(hào)，生效日期等，確認(rèn)實(shí)施前已生效。二是物料：如胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基、瓶子、膠塞、鋁蓋、過濾器，六種標(biāo)準(zhǔn)菌株白色念珠菌、黑曲霉、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌。三是設(shè)備和設(shè)施系統(tǒng)驗(yàn)證情況確認(rèn)：如空氣凈化系統(tǒng)、氣、汽系統(tǒng)、滅菌和除菌系統(tǒng)驗(yàn)證、主要生產(chǎn)設(shè)備驗(yàn)證。

　　5.9培養(yǎng)基性能試驗(yàn)

　　5.9.1培養(yǎng)基無菌性能試驗(yàn)：取模擬灌裝過程中經(jīng)第二道除菌過濾器過濾后初期的培養(yǎng)基溶液100g和灌裝結(jié)束后分液器及針頭殘留溶液用潔凈容器收集100g，送至潔凈室的超凈臺(tái)，將培養(yǎng)基以5ml/支的裝量裝入各20支已滅菌的試管中，各用作培養(yǎng)基無菌性能試驗(yàn)樣品。（注意過濾初期的培養(yǎng)基不得廢棄）。培養(yǎng)管先在20-25℃條件下培養(yǎng)7天，再在30-35℃條件下培養(yǎng)7天，觀察菌落生長情況。培養(yǎng)14天后無微生物生長才算通過。

　　5.9.2培養(yǎng)基微生物生長性能試驗(yàn)：取模擬灌裝過程中經(jīng)第二道除菌過濾器過濾后初期的培養(yǎng)基溶液100g，送至潔凈室的超凈臺(tái)，將培養(yǎng)基以5ml/支的裝量裝入20支已滅菌的試管中，用作培養(yǎng)基生長性能試驗(yàn)樣品。取10支每管裝量為5ml胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基樣品，分別接種菌液濃度為100-1000CFU/ml的菌懸液0.1ml的銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌各3支，另取1支不接種作為空白對照，30-35℃培養(yǎng)3天；取7支每管裝量為5ml胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基樣品，分別接種菌液濃度為100-1000CFU/ml的菌懸液0.1ml的白色念珠菌、黑曲霉菌液各3支，另取1支不接種作為空白對照，20-25℃培養(yǎng)5天。判斷標(biāo)準(zhǔn)是空白對照管應(yīng)無菌生長，加菌的培養(yǎng)基管內(nèi)菌落均生長良好且菌落形態(tài)與所加菌種相符，則該培養(yǎng)基可使用，否則換用其他培養(yǎng)基。

　　5.10模擬灌裝安排

　　一是生產(chǎn)安排，確定灌裝批量，灌裝時(shí)使用多少ml注射劑瓶及相應(yīng)膠塞，每瓶樣品灌裝多少量的培養(yǎng)基溶液，灌裝培養(yǎng)基樣品分別裝載在凍干機(jī)的哪些板層，培養(yǎng)基灌裝的持續(xù)時(shí)間至少達(dá)到多少小時(shí)。灌裝機(jī)按規(guī)定速度進(jìn)行培養(yǎng)基灌裝。模擬整條生產(chǎn)線正常生產(chǎn)過程中的所有活動(dòng)。

　　二是關(guān)鍵功能操作間同時(shí)容納最多人數(shù)的確定，如軋蓋間、清洗間、滅菌間、稱量間、工衣清洗干燥間、洗烘瓶、消毒劑配制、灌裝、凍干前室、配料間等各安排多少人。

　　三是最差工況的確定，我列幾個(gè)主要的如下：

　　1、灌裝間的人員在灌裝期間至少2小時(shí)內(nèi)達(dá)到房間額定的最大人數(shù)（如9人），其他時(shí)間（吃飯時(shí)間除外）不少于4個(gè)人（實(shí)際灌裝操作需4人）。

　　2、滅菌后注射劑瓶、膠塞敞口暴露或暴露在RABS內(nèi)的時(shí)間達(dá)到或超過工藝規(guī)定最大時(shí)間。

　　3、配制開始至第一道過濾結(jié)束持續(xù)時(shí)間，模擬工藝規(guī)定最長間隔時(shí)間。

　　4、模擬灌裝用膠塞、鋁蓋盡量滅菌后存儲(chǔ)大于72小時(shí)后再用于灌裝。

　　5、灌裝機(jī)和進(jìn)出料系統(tǒng)需打開RABS門的干擾事件。如需打開RABS門處理的倒瓶、炸瓶（需開門和不開門處理的炸瓶事件均包括在內(nèi)）、需打開門處理的膠塞堵塞，需打開門處理的灌裝機(jī)裝量調(diào)整、培養(yǎng)碟放置更換、需打開門處理的灌裝針頭排汽泡、需要打開門抽查裝量及可見異物。

　　6、模擬使用無菌風(fēng)險(xiǎn)最差的板層進(jìn)行裝載產(chǎn)品進(jìn)行模擬凍干。

　　7、軋蓋機(jī)和進(jìn)出料系統(tǒng)需要打開RABS門處理的干擾事件。如需打開RABS門處理的鋁蓋震蕩斗卡堵、軋蓋工位卡瓶、反瓶、卡蓋、炸瓶、停機(jī)。

　　8、灌裝機(jī)出現(xiàn)故障，維修人員進(jìn)入灌裝間維修。如模擬灌裝機(jī)運(yùn)行不正常，打開操作屏處電控柜柜門，檢查線路、元件后，關(guān)上電控柜柜門，每次維修時(shí)間約30-60分鐘。

　　9、每批灌裝持續(xù)時(shí)間不少于實(shí)際操作多少個(gè)小時(shí)。

　　10、凍干機(jī)滅菌后最長使用周期。工藝允許在相同產(chǎn)品連續(xù)生產(chǎn)過程中，凍干機(jī)滅菌后的最長使用周期為第N天開始使用，間隔時(shí)間為N-1天。

　　5.11模擬程序

　　一是人員、環(huán)境、物料監(jiān)控。按照日常監(jiān)測方法對各區(qū)域的人員、空氣系統(tǒng)進(jìn)行監(jiān)測，并將監(jiān)測數(shù)據(jù)相關(guān)文件作為附件附在激素凍干粉針生產(chǎn)線模擬無菌灌裝試驗(yàn)驗(yàn)證報(bào)告中。特別是模擬灌裝過程對進(jìn)入B級(jí)區(qū)的所有操作人員均需進(jìn)行監(jiān)控，主要操作人員每次進(jìn)入B級(jí)區(qū)的人員離開退出時(shí)，頭、口罩、胸部、肩部、手指、手肘、膝蓋對其取樣進(jìn)行表面微生物監(jiān)控。

　　二是注射劑瓶、膠塞和鋁蓋處理。記錄試驗(yàn)用膠塞及鋁蓋滅菌結(jié)束時(shí)間，試驗(yàn)用膠塞及鋁蓋的領(lǐng)用時(shí)間，并計(jì)算二者間隔，試驗(yàn)需要膠塞及鋁蓋滅菌后儲(chǔ)存至少72小時(shí)方可用于模擬灌裝使用。

　　三是注射劑瓶、膠塞無菌檢查。模擬灌裝試驗(yàn)過程中，取部分已滅菌膠塞、已除熱原注射劑瓶敞口暴露于A級(jí)區(qū)域，記錄放置起始時(shí)間、放置結(jié)束時(shí)間，計(jì)算時(shí)間間隔，同時(shí)分別將部分模擬灌裝結(jié)束后的物料進(jìn)行無菌檢查，其余物料用于正常模擬灌裝并區(qū)別，檢查結(jié)果記錄于“滅菌后膠塞、除熱原后劑瓶敞口放置時(shí)間檢查表”中。

　　四是灌裝器具滅菌處理。模擬灌裝試驗(yàn)過程中，記錄灌裝用具滅菌結(jié)束時(shí)間，開始使用時(shí)間；記錄并計(jì)算相應(yīng)的時(shí)間間隔，由于過程模擬時(shí)間較長，且前期均做過相關(guān)確認(rèn)，故模擬灌裝過程中每年至少模擬一次。

　　五是凍干機(jī)滅菌處理。模擬灌裝試驗(yàn)過程中，記錄凍干機(jī)滅菌日期至模擬灌裝生產(chǎn)時(shí)使用日期；并計(jì)算相應(yīng)的時(shí)間間隔，由于過程模擬時(shí)間較長，且前期均做過相關(guān)確認(rèn)，故模擬灌裝過程中每年至少模擬一次。

　　六是培養(yǎng)基的配制及處理。

　　l按每批如2萬瓶以上瓶產(chǎn)品的模擬灌裝量，計(jì)算配制量。

　　l通過無菌氮?dú)鈮簽V將培養(yǎng)基溶液經(jīng)第一道除菌過濾器過濾至無菌存儲(chǔ)罐。培養(yǎng)基溶液第一道過濾結(jié)束至第二道過濾開始間隔時(shí)間在N小時(shí)以內(nèi)。

　　l通過無菌氮?dú)鈮簽V，將培養(yǎng)基從無菌儲(chǔ)存罐經(jīng)第二道過濾器過濾后送至灌裝機(jī)上的緩沖罐，進(jìn)行灌裝操作，當(dāng)灌裝瓶數(shù)可以分別裝滿兩個(gè)凍干箱各一個(gè)板層即約N瓶時(shí)，停止對無菌儲(chǔ)存罐和緩沖罐內(nèi)剩余培養(yǎng)基溶液的灌裝。這一階段中所有正常生產(chǎn)過程中的操作，如取樣、過濾器完整性試驗(yàn)等也按實(shí)際生產(chǎn)進(jìn)行模擬。

　　l在灌裝開始前取經(jīng)第二道除菌過濾器過濾后灌裝開始前的培養(yǎng)基溶液約100g，用于培養(yǎng)基無菌性能試驗(yàn)，并計(jì)算物料平衡。

　　l藥液從配制開始到第一道過濾結(jié)束間隔時(shí)間驗(yàn)證：按照《配料系統(tǒng)操作規(guī)程》使用配料系統(tǒng)配制胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基溶液。稱量Ng胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基在NL的桶中初步溶解后，再倒入混合罐中加水定容至Nkg攪拌混合均勻，模擬中間體檢驗(yàn)結(jié)果等待，從配制開始即培養(yǎng)基開始溶解至第一道過濾結(jié)束應(yīng)不少于4小時(shí)。模擬回收配料第二道跨接管剩余培養(yǎng)基，經(jīng)兩道過濾后進(jìn)行灌裝，回收后灌裝產(chǎn)品與其他產(chǎn)品一起培養(yǎng)。

　　l將培養(yǎng)基溶液配制及藥液模擬回收時(shí)間記入“配制開始到第一道過濾結(jié)束間隔時(shí)間驗(yàn)證記錄表”中。

　　七是無菌灌裝

　　l培養(yǎng)基模擬灌裝批生產(chǎn)的灌裝間人員：在生產(chǎn)結(jié)束人員將退出B級(jí)區(qū)時(shí)做微生物接觸碟取樣，通過表面微生物監(jiān)測結(jié)果和培養(yǎng)基模擬試驗(yàn)的最終結(jié)果，確認(rèn)可進(jìn)行無菌生產(chǎn)的操作人員資質(zhì)，沒有按照要求參加培養(yǎng)基灌裝的人員不能直接參與實(shí)際生產(chǎn)。

　　l灌裝班人員交接班工況：模擬灌裝試驗(yàn)過程中，模擬灌裝班人員換班操作2次，記錄每次換班時(shí)間及人員，每批兩次，其中進(jìn)、出≥2次。檢查結(jié)果記錄于“灌裝班人員交接班記錄表”中。

　　l模擬灌裝過程安排：按灌裝操作程序，將膠塞加入料斗內(nèi)，注射劑瓶進(jìn)入灌裝機(jī)，過濾后培養(yǎng)基溶液送至灌裝機(jī)上緩沖罐后，啟動(dòng)灌裝機(jī)進(jìn)行灌裝進(jìn)箱、模擬凍干、軋蓋；軋蓋后樣品輸送至目檢工序進(jìn)行目檢。培養(yǎng)基第二道過濾開始至進(jìn)料結(jié)束持續(xù)時(shí)間不小于N小時(shí)（包括交接班換班吃飯時(shí)間，模擬維修時(shí)間，空轉(zhuǎn)時(shí)間）。灌裝過程所有的正常操作如稱重、檢查、取樣等都應(yīng)模擬進(jìn)行，灌裝過程模擬檢查可見異物和裝量差異的樣品，樣品需無菌壓塞后再模擬檢查，檢查結(jié)束后的樣品，若無破裂和損壞，則均應(yīng)隨模擬灌裝產(chǎn)品一起進(jìn)行培養(yǎng)，同時(shí)做好標(biāo)記。

　　l打開/不打開RABS干擾事件工況：模擬灌裝試驗(yàn)過程中，根據(jù)日常生產(chǎn)實(shí)際所發(fā)生的情況及次數(shù)，模擬灌裝、軋蓋RABS開門/不開門發(fā)生的干擾事件，并實(shí)時(shí)記錄干擾事件發(fā)生時(shí)間及類型，檢查結(jié)果記錄于“打開/不打開RABS干擾事件統(tǒng)計(jì)表”中，干擾事件分別記錄于“灌裝過程打開RABS門干擾事件A記錄表”“灌裝過程不開RABS門干擾事件B記錄表”“出箱軋蓋過程開RABS門干擾事件C記錄表”“出箱軋蓋過程不開RABS門干擾事件D記錄表”。

　　l灌裝機(jī)故障維修工況：模擬灌裝試驗(yàn)過程中，模擬灌裝故障維修，如每批模擬灌裝模擬兩次維修，第一次模擬灌裝機(jī)瓶子在出料星輪處堵塞，出料星輪離合器過載，移除堵塞的瓶子，重新將星輪安裝調(diào)整至合適的位置，維修時(shí)間約40分鐘；第二次模擬灌裝機(jī)運(yùn)行不正常，打開灌裝機(jī)機(jī)臺(tái)下維修柜門，檢查線路、部件后，關(guān)上維修柜門，維修時(shí)間約30分鐘。

　　l灌裝時(shí)間確認(rèn)：工藝規(guī)程規(guī)定每批產(chǎn)品灌裝從第二道除菌過濾開始至灌裝結(jié)束時(shí)間應(yīng)≤N小時(shí)。在模擬灌裝試驗(yàn)過程中，記錄模擬灌裝從第二道除菌過濾開始至灌裝結(jié)束時(shí)間，檢查結(jié)果記錄于“灌裝時(shí)間記錄表”中。

　　l凍干操作：按照以下程序模擬樣品在凍干箱內(nèi)的狀態(tài)：灌裝制品N℃進(jìn)箱，冷凍制品→放置樣品的隔板溫度均降至約N℃→冷阱溫度降至-N℃以下→凍干箱抽真空約Nmbar→打開放氣閥放氣→加熱隔板→隔板溫度升至N℃→凍干箱抽真空約Nmbar→全壓塞→打開放氣閥放氣→樣品出箱。

　　l出箱、軋蓋：出箱后凍干箱的樣品需收集，每個(gè)收集樣品的中轉(zhuǎn)盤上需標(biāo)明收集序號(hào)。收集軋蓋后的樣品，目檢后培養(yǎng)時(shí)將樣品一半正立放置、一半倒立放置。記錄記錄出箱、軋蓋開始到出箱、軋蓋結(jié)束時(shí)間，確認(rèn)出箱、軋蓋持續(xù)時(shí)間不少于12小時(shí)。

　　5.12模擬灌裝樣品檢查

　　一是灌裝制品培養(yǎng)前檢查：

　　l灌裝制品經(jīng)軋蓋后，包裝班人員在軋蓋出瓶軌道末端按順序接受樣品，并裝入中轉(zhuǎn)盤中，每個(gè)中轉(zhuǎn)盤上標(biāo)記樣品接收序號(hào)。

　　由包裝目檢人員目檢瓶身破損及鋁蓋、膠塞密封等缺陷情況，若有缺陷品，則剔除缺陷品并記錄缺陷數(shù)量及缺陷原因。

　　目檢挑出的空瓶、破瓶、無塞中間產(chǎn)品作銷毀處理；

　　目檢挑出的松蓋、皺蓋、淺蓋、色點(diǎn)、裝量差異不合格中間產(chǎn)品在鋁蓋頂部標(biāo)記并登記，按原順序放置于中轉(zhuǎn)筐或盤中與正常產(chǎn)品同樣條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)結(jié)束后檢查；

　　若目檢發(fā)現(xiàn)渾濁樣品，則記錄樣品的盤號(hào)及其在盤中的順序號(hào)，與正常產(chǎn)品同樣條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)周期結(jié)束后，送微生物室鑒別。

　　l目檢時(shí)上下顛倒振搖，保證培養(yǎng)基溶液與整個(gè)玻璃瓶和膠塞的內(nèi)表面充分接觸后，將灌裝制品按不同批號(hào)區(qū)分，按順序裝入不銹鋼盤或中轉(zhuǎn)筐。

　　二是灌裝制品的培養(yǎng)及檢查：

　　l培養(yǎng)：將灌裝制品按不同批號(hào)區(qū)分，同一批號(hào)不同板層的灌裝制品也需分開放置（小批號(hào)樣品一半正立放置、一半倒立放置），裝入中轉(zhuǎn)筐中，先置20-25℃培養(yǎng)7天，進(jìn)行目檢，將正立轉(zhuǎn)成倒立，將倒立轉(zhuǎn)成正立，將再置30-35℃培養(yǎng)7天；記錄培養(yǎng)的起止時(shí)間，且灌裝制品培養(yǎng)期間每兩個(gè)小時(shí)至少記錄一次培養(yǎng)溫度至制品結(jié)束培養(yǎng)。在房間培養(yǎng)培養(yǎng)基樣品，房間四個(gè)角和中央處均放置一個(gè)溫度計(jì)，到達(dá)記錄時(shí)間點(diǎn)后記錄同一個(gè)房間內(nèi)每個(gè)溫度計(jì)顯示的溫度。將樣品的培養(yǎng)觀察結(jié)果記錄試驗(yàn)批樣品培養(yǎng)觀察記錄”中。

　　l檢查：樣品在20～25℃下培養(yǎng)的7天、30～35℃培養(yǎng)的7天后，至少在第7天，第14天，由經(jīng)過QC微生物檢驗(yàn)資質(zhì)人員的培訓(xùn)的目檢人員（同時(shí)應(yīng)當(dāng)有QC現(xiàn)場指導(dǎo)）對培養(yǎng)后的制品的微生物生長情況進(jìn)行檢查，并由QA人員對檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行復(fù)核，若發(fā)現(xiàn)有被微生物污染的制品，應(yīng)記錄瓶數(shù)、中間產(chǎn)品批號(hào)，并對菌種進(jìn)行鑒別。

　　l陽性對照：在模擬灌裝的樣品培養(yǎng)14天結(jié)束后，每批隨機(jī)抽取培養(yǎng)基樣品N瓶（抽取的樣品需兼顧到每個(gè)板層的樣品），壓緊膠塞，送樣至檢驗(yàn)室。檢驗(yàn)室人員對樣品隨機(jī)分成五組，每組12瓶，每組分別接種銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉、生孢梭菌，接種量均為每瓶0.1ml濃度為100~1000cfu/ml的菌，然后進(jìn)行培養(yǎng)。接種銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌的樣品在30-35℃培養(yǎng)3天，接種白色念珠菌、黑曲霉、生孢梭菌的產(chǎn)品在20-25℃培養(yǎng)5天。

　　5.13模擬灌裝物料平衡

　　l灌裝后培養(yǎng)基樣品丟棄記錄：

　　整個(gè)培養(yǎng)基灌裝過程中需要嚴(yán)格控制丟棄任何已經(jīng)灌裝的培養(yǎng)基,任何丟棄都要有充分的理由,并做好相應(yīng)的記錄和解釋，只要符合最低灌裝量，就不應(yīng)該丟棄。但如果是膠塞上位不正確的培養(yǎng)基，由于密閉系統(tǒng)不完整，必須進(jìn)行丟棄。將灌裝、軋蓋、目檢、培養(yǎng)過程中分灌裝后培養(yǎng)基的丟棄記錄記入“灌裝后培養(yǎng)基樣品丟棄記錄表中。

　　l物料平衡計(jì)算：

　　配灌工序中間產(chǎn)品物料平衡；自動(dòng)進(jìn)出料、凍干、軋蓋工序中間產(chǎn)品物料平衡；目檢工序中間產(chǎn)品物料平衡。

　　5.14驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)及結(jié)果評定

　　一是驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)。培養(yǎng)基模擬灌裝應(yīng)以不長菌為目標(biāo)，并遵循以下規(guī)則：

　　l當(dāng)灌裝數(shù)少于5000單位時(shí)，不得檢出污染；

　　l當(dāng)灌裝數(shù)在5000-10000單位之間：

　　·出現(xiàn)一個(gè)污染單位，應(yīng)進(jìn)行調(diào)查，包括考慮重新進(jìn)行培養(yǎng)基灌裝；

　　·出現(xiàn)兩個(gè)污染單位，應(yīng)在調(diào)查后進(jìn)行再驗(yàn)證。

　　l當(dāng)灌裝數(shù)在10000單位以上：

　　§出現(xiàn)一個(gè)污染單位應(yīng)進(jìn)行調(diào)查；

　　§出現(xiàn)兩個(gè)污染單位，應(yīng)在調(diào)查后進(jìn)行再驗(yàn)證。

　　二是結(jié)果評定：結(jié)果均應(yīng)達(dá)到不長菌的目標(biāo)，任何一次超過規(guī)定，且長菌的樣品不是因?yàn)槿萜鞯钠茡p造成的，則驗(yàn)證無效，應(yīng)查明污染產(chǎn)生的原因，方可判斷此灌裝工藝過程符合無菌灌裝要求。

　　5.15驗(yàn)證周期

　　l培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)每半年進(jìn)行一次；

　　l生產(chǎn)工藝變更、重要技術(shù)參數(shù)改變時(shí)、班次數(shù)有重要的變更后或關(guān)鍵設(shè)備更換、大修、變更安裝位置等，須根據(jù)評估結(jié)果重新進(jìn)行再驗(yàn)證。

　　5.16驗(yàn)證計(jì)劃實(shí)施情況確認(rèn)

　　5.17工藝驗(yàn)證合格標(biāo)準(zhǔn)總結(jié)

　　審核該已實(shí)施的培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)，并確認(rèn)所有的標(biāo)準(zhǔn)均已達(dá)到。如果方案有任何未完成項(xiàng)目，請說明。

　　5.18方案修改

　　按驗(yàn)證實(shí)施和記錄標(biāo)準(zhǔn)操作程序，在驗(yàn)證實(shí)施過程中如出現(xiàn)需要對方案進(jìn)行修訂的情況，填寫“驗(yàn)證方案修訂申請表”，并在“驗(yàn)證方案修訂記錄表”中記錄本項(xiàng)驗(yàn)證實(shí)施過程中所作的每一項(xiàng)方案修訂。

　　5.19方案偏差

　　按驗(yàn)證實(shí)施和記錄標(biāo)準(zhǔn)操作程序，在驗(yàn)證實(shí)施過程中如出現(xiàn)偏差或變更，填寫“偏差表格”對偏差進(jìn)行調(diào)查和處理。

　　5.20附錄

　　將所有驗(yàn)證方案適用的數(shù)據(jù)和資料附在附件內(nèi)。當(dāng)添加資料/數(shù)據(jù)到附錄部分時(shí)，請按表填寫，并注明附錄中的頁數(shù)，若添加頁沒有編頁碼的，手動(dòng)添加。

　　三、模擬灌裝試驗(yàn)的問題討論（共八個(gè)問題）

　　1、2015版中國藥典需氧菌和真菌無菌檢查改為胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB），模擬灌裝試驗(yàn)的培養(yǎng)基要改嗎？

　　答：不需要改。一般選廣譜的胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB），真菌、細(xì)菌都能長。如果以往產(chǎn)品有過厭氧成長，可以用硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基（FTM）模擬，同樣條件去做模擬灌裝試驗(yàn)，厭氧培養(yǎng)基一般會(huì)分層，上層用于隔絕下層的空氣層導(dǎo)致厭氧菌在上層不長。厭氧菌要長也是在下層，但因有些瓶子不大，如2ml或5ml瓶子無法造出隔絕空氣層，因模擬陽性菌瓶也是不長的，所以，既使有厭氧菌也難以存活，故大多企業(yè)是沒有做厭氧培養(yǎng)基的模擬灌裝試驗(yàn)。

　　2、指南征求稿中關(guān)于培養(yǎng)時(shí)間至少14天，一般采用先在20-25℃最少培養(yǎng)7天，然后在30-35℃的范圍繼續(xù)培養(yǎng)7天。也可采用單一的20-35℃的培養(yǎng)條件，但應(yīng)有相關(guān)的數(shù)據(jù)證明培養(yǎng)條件有利于微生物的生長。一是能否先30-35℃后20-25℃培養(yǎng)？二是采用單一的20-35℃培養(yǎng)怎么操作？

　　答：第一個(gè)問題：就是先低溫真菌培養(yǎng)、再高溫細(xì)菌培養(yǎng)，因擔(dān)心有些低溫菌先高溫30-35℃培養(yǎng)會(huì)被殺死。另外，真菌相對細(xì)菌生長得慢，所以先培養(yǎng)真菌7天，后面還有7天的時(shí)間可繼續(xù)長。而細(xì)菌生長得快，一般3天就能看出大致，所以可以后培養(yǎng)。

　　第二個(gè)問題：培養(yǎng)基灌裝的培養(yǎng)溫度，可以在做完培養(yǎng)基的促成長試驗(yàn)后，選擇一個(gè)20-35℃的溫度進(jìn)行培養(yǎng)，但培養(yǎng)箱的溫度要控制在正負(fù)2.5℃。

　　3、什么是培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)的“最差條件”？（轉(zhuǎn)摘自醫(yī)藥微學(xué)堂，文章由四川蜀陽周珍字提供）

　　答：2010版藥品GMP指南：在培養(yǎng)基灌裝設(shè)計(jì)中，工藝條件的選擇應(yīng)選取合理的“最差條件”，用最差條件來對工藝流程、設(shè)備和整個(gè)體系進(jìn)行挑戰(zhàn)。如果在最差條件下能獲得好結(jié)果，說明在比最差情況要好的實(shí)際生產(chǎn)中，無菌保證的可靠性更有保證。“最差條件”考慮如下三個(gè)方面：

　　一是設(shè)施、設(shè)備、包材和輔料清潔、滅菌后存放時(shí)間：

　　二是灌裝人員及參數(shù)設(shè)定：

　　三是干擾項(xiàng)目的設(shè)計(jì)：

　　模擬實(shí)際生產(chǎn)過程中出現(xiàn)的各種類型的常規(guī)性干擾和非常規(guī)性干擾。在每半年的培養(yǎng)基灌裝前應(yīng)對上一階段的生產(chǎn)狀況進(jìn)行總結(jié)和趨勢分析，綜合考慮有代表性的活動(dòng)及干預(yù)，將其干擾類型與頻次列入方案中。從人、機(jī)、料、法、環(huán)、測各方面綜合考慮，組合出最具有代表的“最差條件”。

　　4、人員重大變更，是否需要進(jìn)行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)才能正式上崗？

　　答：無菌藥品附錄中第47條：培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)的首次驗(yàn)證，每班次應(yīng)當(dāng)連續(xù)進(jìn)行3次合格試驗(yàn)。空氣凈化系統(tǒng)、設(shè)備、生產(chǎn)工藝及人員重大變更后，應(yīng)當(dāng)重復(fù)進(jìn)行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)。培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)通常應(yīng)當(dāng)按照生產(chǎn)工藝每班次半年進(jìn)行1次，每次至少一批。人員重大變更，肯定需要重新進(jìn)行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)，只有參加過模擬灌裝試驗(yàn)的人員，才可以進(jìn)入到核心灌裝區(qū)進(jìn)行正常產(chǎn)品生產(chǎn)的操作。

　　5、在培養(yǎng)基模擬灌裝結(jié)束后，在培養(yǎng)時(shí)，是否所有的西林瓶都要倒置培養(yǎng)，還是只需要部分的倒置培養(yǎng)即可？

　　答：只要培養(yǎng)基與西林瓶所有接觸面接觸過就可以，無論正立、倒立或平放。行內(nèi)有三種做法：一是培養(yǎng)基模擬灌裝結(jié)束，正常的培養(yǎng)，不需要倒置，培養(yǎng)基培養(yǎng)期間，瓶子里的任何表面都要被培養(yǎng)基接觸到，翻轉(zhuǎn)幾次就可以了；二是將培養(yǎng)液與西林瓶和膠塞充分接觸，然后一半倒立培養(yǎng)、一半正立培養(yǎng)；三是將培養(yǎng)液與西林瓶和膠塞充分接觸，在20-25度正立培養(yǎng)7天，30-35度倒立培養(yǎng)7天。指南征求稿中是第一種，就是培養(yǎng)前，對模擬灌裝產(chǎn)品進(jìn)行顛倒、輕搖以使培養(yǎng)基接觸所有內(nèi)表面，再正立培養(yǎng)，開始培養(yǎng)后不應(yīng)再進(jìn)行反轉(zhuǎn)等干擾。我們是第二種和第三種的混合，如先將灌裝制品按不同批號(hào)區(qū)分，同一批號(hào)不同板層的灌裝制品也需分開放置（小批號(hào)樣品一半正立放置、一半倒立放置），裝入中轉(zhuǎn)筐中，先置20-25℃培養(yǎng)7天，進(jìn)行目檢，將正立轉(zhuǎn)成倒立，將倒立轉(zhuǎn)成正立，將再置30-35℃培養(yǎng)7天。

　　6、如何判斷哪些灌裝樣品不需要進(jìn)行培養(yǎng)？

　　答：包括破損，影響到密封性的樣品；完整性測試（泄漏測試）失敗的樣品；文件中明確規(guī)定予以丟棄的中控測試樣品；設(shè)備自動(dòng)剔除的樣品；文件中明確規(guī)定，每次干擾后應(yīng)予手工剔除的樣品（規(guī)定應(yīng)詳細(xì)、明確，并需證明其可操作性和穩(wěn)定可信性）。另外，剔除的樣品應(yīng)進(jìn)行記錄注明丟棄原因。

　　7、在培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)中，是否必須進(jìn)行錄像？錄像的保存期需要多長？

　　答：不是必需的，錄像僅是一種可選的輔助調(diào)查和培訓(xùn)手段。如果采用了錄像措施，也僅作為公司內(nèi)部的資料（如同內(nèi)部審計(jì)報(bào)告），不必向檢查員出示。公司應(yīng)有文件規(guī)定，什么情況下要進(jìn)行錄像，錄像的儲(chǔ)存時(shí)間等。

　　8、是否可在培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)中模擬停電的狀況？

　　答：不允許。停電后，核心灌裝區(qū)的AB級(jí)無法保證無菌性，如果可以模擬，還要A級(jí)監(jiān)測相關(guān)指標(biāo)做什么？一旦A級(jí)沒電，沒有層流保護(hù)，無菌狀態(tài)被破壞了，即使你無菌檢測是合格的，畢竟檢測只是僅有代表性，有其無菌檢測局限性。不能以培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)中模擬停電為產(chǎn)品放行為借口，可考慮A級(jí)有UPS或22S內(nèi)迅速轉(zhuǎn)供電也是可以的。