一、模擬灌裝試驗指南征求稿

　　最近網(wǎng)上流傳SFDA查驗中心2016年7月發(fā)布了《無菌制劑培養(yǎng)基模擬灌裝試驗指南》（征求意見稿），大致內(nèi)容概述如下：

　　1、目的：充分評價藥品生產(chǎn)企業(yè)的無菌操作水平。

　　2、適用范圍：采用無菌生產(chǎn)工藝生產(chǎn)的無菌制劑。

　　3、定義：模擬無菌操作全過程，以評價無菌保證水平。

　　4、原則：模擬試驗的前提是GMP合規(guī)；首次或變更后需要對無菌生產(chǎn)過程風險點進行事先評估，評估結(jié)果在試驗方案設計中予以考慮；關注開放操作、人工干預等高風險過程；多產(chǎn)品多規(guī)格和顯著差異的無菌工藝過程逐一開展模擬試驗。

　　5、模擬范圍：從第一步無菌操作開始，直至無菌產(chǎn)品完全密封結(jié)束。

　　6、方案設計及實施過程：

　　6.1前提條件是，廠房設施、文件、人員更衣及培訓、密封性驗證等均已完成；

　　6.2方案設計，應重點評估無菌操作的高風險過程，重點考察有人員參與的關健操作，證實無菌操作人員滿足無菌生產(chǎn)要求。

　　6.3培養(yǎng)基：一般選廣譜的胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB），厭氧產(chǎn)品可用硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基（FTM），如為動物來源培養(yǎng)基，需提供無BSE（可傳染性海綿腦病）/TSE（瘋牛?。┳C明，也可先植物來源的培養(yǎng)基。

　　6.3.1培養(yǎng)基促生長能力試驗，包括白色念珠菌（CMCC98001）、黑曲霉（CMCC98003）、枯草芽孢桿菌（CMCC63501）、金黃色葡萄球菌（CMCC26003）、銅綠假單胞菌（CMCC10104）、生孢梭菌（CMCC64941）六種標準菌株，還應考慮加入環(huán)境和無菌檢查中發(fā)現(xiàn)的微生物，且接種量應控制在10CFU-100CFU/灌裝單位，5天的促生長試驗，應證明培養(yǎng)基能夠支持微生物的生長。

　　6.3.2培養(yǎng)基配制：應按照培養(yǎng)基生產(chǎn)商提供的配方配制培養(yǎng)基，并考慮降低非無菌培養(yǎng)基中細菌和霉菌生長的風險，以避免微生物生長導致培養(yǎng)基過濾性能降低。

　　6.3.3培養(yǎng)基的除菌與滅菌：除菌過濾，其可靠性是通過專門的除菌過濾挑戰(zhàn)實驗驗證的，無法通過培養(yǎng)基模擬灌裝試驗的結(jié)果證實。濕熱滅菌，要避免過度滅菌，可采用濕熱滅菌與除菌過濾聯(lián)合使用的方式，但都應進行促生長性能檢查。輻照滅菌，可避免支原體污染風險，常與除菌過濾聯(lián)合使用。

　　6.4灌裝量：灌裝量通常應能達到容器體積的1/3～1/2，即可保證產(chǎn)品通過倒置和旋轉(zhuǎn)接觸到所有內(nèi)表面并有足夠的氧氣支持微生物的生長，以利于對培養(yǎng)基的觀察。企業(yè)應基于風險評估的原則對所設計的灌裝數(shù)量、持續(xù)時間、模擬方式、預期收率作出合理說明。對大規(guī)模生產(chǎn)，即產(chǎn)品的生產(chǎn)批量大于10000支，最低模擬灌裝數(shù)量應不低于10000支，且不應低于產(chǎn)品實際生產(chǎn)批量的10%。

　　6.5最差條件的選擇（關鍵點）：應基于風險等級并結(jié)合無菌生產(chǎn)工藝、設備裝備水平、人員數(shù)量和干預等因素來設計模擬試驗最差條件。值得注意的是最差條件并不是指人為創(chuàng)造的超出允許范圍的生產(chǎn)狀況和環(huán)境，比如故意做AB級停電的無菌挑戰(zhàn)是不能接受的。包括人員：應包括日常參與到無菌生產(chǎn)的全部人員，如生產(chǎn)操作、取樣、環(huán)境監(jiān)測和設備設施維護人員，同時應考慮以上人員交叉作業(yè)、班次輪換、更衣、夜班疲勞狀態(tài)等因素。工藝時間：應適當考慮模擬實際生產(chǎn)操作過程中房間、設備、物料消毒或滅菌后放置的最長時間及最長的工藝保留時限等。灌裝速度：采用最慢的灌裝速度、最大的容器用以模擬最長暴露時間，也可采用最快的灌裝速度、最小的容器用以模擬最大操作強度/難度。環(huán)境：模擬試驗挑戰(zhàn)的最差環(huán)境應考慮選擇單批產(chǎn)品無菌生產(chǎn)周期末端、間歇式生產(chǎn)的空調(diào)系統(tǒng)重新開啟后或連續(xù)生產(chǎn)期間周期性滅菌最長的時間間隔。

　　6.6接下來是“干預”：干預可分為固有的干預和糾正性干預。固有干預是指常規(guī)和有計劃的無菌操作，如裝載膠塞，環(huán)境監(jiān)控，設備安裝等；糾正性干預則是指對無菌生產(chǎn)過程的糾正或調(diào)整，如生產(chǎn)過程中清除破碎的瓶子，排除卡住的膠塞，更換部件、設備故障排除等。

　　6.7容器規(guī)格與容器閉封組合：一般選擇應對最小和最大尺寸的容器進行培養(yǎng)基灌裝模擬試驗，通常采用透明的容器代替不透明或棕色的容器，以保證識別受污染模擬產(chǎn)品的能力。

　　6.8培養(yǎng)前的容器檢查：模擬試驗中完整性缺陷產(chǎn)品的剔除工藝應采用日常生產(chǎn)的剔除工藝，除完整性缺陷的產(chǎn)品外，其他外觀缺陷、灌裝量異常的模擬產(chǎn)品也應進行培養(yǎng)并用于評估污染率。

　　6.9培養(yǎng)條件：培養(yǎng)前，應對模擬灌裝產(chǎn)品進行顛倒、輕搖以使培養(yǎng)基接觸所有內(nèi)表面。培養(yǎng)時間至少14天，一般采用先在20-25℃最少培養(yǎng)7天，然后在30-35℃的范圍繼續(xù)培養(yǎng)7天。也可采用單一的20-35℃的培養(yǎng)條件，但應有相關的數(shù)據(jù)證明培養(yǎng)條件有利于微生物的生長。

　　6.10培養(yǎng)后的檢查：應對所有模擬灌裝產(chǎn)品逐支進行無菌性檢查，在培養(yǎng)期間定期觀察培養(yǎng)基的培養(yǎng)情況，如在培養(yǎng)期間發(fā)現(xiàn)陽性樣品，應做標記并立即移出培養(yǎng)箱（室）。

　　6.11計數(shù)與數(shù)額平衡：對各個階段的模擬灌裝產(chǎn)品進行準確計數(shù)：包括灌裝、培養(yǎng)前檢查、培養(yǎng)后檢查的數(shù)量等。

　　6.12環(huán)境及監(jiān)控：采樣人員無菌操作能力及環(huán)境監(jiān)測對無菌灌裝的影響都應在培養(yǎng)基模擬灌裝試驗中充分評估。

　　6.13人員因素：所有被授權在生產(chǎn)時進入無菌灌裝間的人員，包括觀察人員和維修人員，每年至少參加一次成功的培養(yǎng)基模擬灌裝試驗，方可參與正常生產(chǎn)的無菌操作，應保留人員參與相關模擬試驗的記錄。

　　6.14方案的實施：模擬試驗的結(jié)果、評估和結(jié)論應形成書面報告并經(jīng)質(zhì)量管理部門批準，根據(jù)實施記錄，為通過模擬驗證的人員頒發(fā)確認書并規(guī)定有效期限。

　　7、可接受標準與結(jié)果判斷：培養(yǎng)基模擬灌裝試驗可接受標準應當遵循現(xiàn)行GMP無菌附錄中的有關規(guī)定。應基于風險評估的原則制定科學合理的內(nèi)控限度；出現(xiàn)任何陽性均應進行徹底、規(guī)范的調(diào)查；在科學評估的基礎上采取適當?shù)募m偏措施。如果連續(xù)進行的模擬灌裝批中反復出現(xiàn)陽性意味著無菌生產(chǎn)工藝存在系統(tǒng)性問題，必須得到有效解決。

　　8、污染調(diào)查及糾正措施：

　　8.1不管批量有多大，只要無菌工藝驗證存在污染，意味著無菌保證可能存在問題，發(fā)現(xiàn)任何污染樣品均應進行調(diào)查，應利用一切可能的方法調(diào)查污染的來源，污染調(diào)查流程及方法應在方案中明確規(guī)定。模擬灌裝中出現(xiàn)任何數(shù)量的污染都必須視為偏差并徹底調(diào)查。分離到的污染微生物應鑒別到種屬，鑒別結(jié)果應與本次試驗過程所有微生物檢測結(jié)果及企業(yè)微生物菌種庫進行對比，為查找污染途徑提供可能的依據(jù)。調(diào)查的關鍵是找到污染的來源，結(jié)合調(diào)查需要，必要時應制定完整的取樣和微生物鑒別計劃，調(diào)查過程應有記錄并歸檔。

　　8.2如調(diào)查找到指定的原因，應制定糾正預防措施，并再次進行模擬試驗，以證明措施的有效性。如調(diào)查無指定原因，應對生產(chǎn)工藝過程的無菌控制開展系統(tǒng)性評估，同時應適當增加試驗批次。

　　8.3調(diào)查結(jié)果應形成書面報告并得到質(zhì)量管理部門的批準。

　　9、試驗周期及再驗證：

　　9.1新建無菌生產(chǎn)線，在正式投產(chǎn)之前，每班次應當連續(xù)進行3次合格試驗，在無菌生產(chǎn)工藝中一條生產(chǎn)線存在多臺相同功能設備時，應進行風險評估決定相關驗證次數(shù)，但每臺設備應至少進行一次模擬試驗。

　　9.2正常生產(chǎn)期間應當按照生產(chǎn)工藝每條生產(chǎn)線每班次每半年進行一次，每次至少一批。對于設備因其它原因停產(chǎn)一定周期的生產(chǎn)線，在恢復正式生產(chǎn)前應考慮進行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗

　　9.3空氣凈化系統(tǒng)、生產(chǎn)用設備、無菌生產(chǎn)工藝及人員重大變更或設備的重大維修后，應當進行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗。

　　9.4企業(yè)應充分評估生產(chǎn)線的風險，在發(fā)現(xiàn)設施、人員、環(huán)境或工藝的持續(xù)監(jiān)測出現(xiàn)不良趨勢或無菌不合格時，也應考慮再次進行模擬試驗。

　　二、模擬灌裝試驗的實例

　　列舉一個廠凍干針劑例子，方案介紹如下：

　　1、標題：XXX凍干粉針劑生產(chǎn)線培養(yǎng)基模擬灌裝試驗驗證方案

　　2、簽批：生產(chǎn)起草，由技術、檢驗、驗證、QA等部門審核，最終QP批準。

　　3、修訂歷史記錄：版本、修訂日期、修訂/更改要求的原因、修訂人等。

　　4、目錄：有20個項目，列有內(nèi)容標題和頁碼。

　　5、正文

　　5.1目的：

　　根據(jù)GMP規(guī)范要求和廠驗證主計劃要求，特擬定本方案，對該生產(chǎn)線的無菌生產(chǎn)工藝進行再驗證，通過此次驗證確保該凍干劑生產(chǎn)線無菌保證水平。

　　本方案盡量使用與實際生產(chǎn)工藝相同的條件和操作方法，同時模擬最差灌裝工況，向注射劑瓶內(nèi)灌裝經(jīng)除菌過濾器過濾的胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基（TSBmedium），然后半壓塞、模擬凍干、壓塞、軋蓋；將此制品在適當條件下培養(yǎng)檢查其受微生物污染的程度，以確認無菌生產(chǎn)工藝過程的可靠性，并確認所采用的各種方法和規(guī)程防止微生物污染的水平能達到可接受的合格標準。

　　通過模擬灌裝試驗確認以下可能導致產(chǎn)品微生物污染的工況對產(chǎn)品無菌性的影響：

　　1灌裝間的潔凈環(huán)境

　　2灌裝過程中直接與產(chǎn)品接觸的器具及物料的使用前的儲存時間

　　3在RABS層流保護下，膠塞、瓶子暴露4小時后的無菌性

　　4無菌生產(chǎn)潔凈區(qū)操作人員數(shù)量及無菌操作技能

　　5灌裝過程持續(xù)的時間

　　6灌裝人員的交接班過程

　　7操作人員通過RABS手套對灌裝、軋蓋過程進行干擾的次數(shù)和時間（未打開門）

　　8操作人員打開RABS門對灌裝、軋蓋過程進行干擾的次數(shù)和時間（打開門）

　　9環(huán)境監(jiān)測和取樣過程

　　10使用無菌風險最高的板層模擬培養(yǎng)基凍干操作

　　11灌裝過程中設備故障的維修過程

　　12凍干機滅菌后最長使用時間

　　13出箱持續(xù)時間

　　14軋蓋持續(xù)時間

　　5.2概述：其中工藝描述包括批量、產(chǎn)品包裝形式、包裝組件規(guī)格、生產(chǎn)線速度（模擬灌裝的高、中、低速）、洗瓶、配料、灌裝、凍干、軋蓋的工藝過程描述；相對上次是否發(fā)生變更及風險評估。畫出凍干粉針劑的生產(chǎn)線工藝流程圖。

　　5.3參考文件：如SFDA的藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范--無菌附錄（2010年）、藥品GMP指南--無菌藥品（2010年）、藥品生產(chǎn)驗證指南（2003版）、EU的GuidetoGoodManufacturingPracticeforMedicinalProducts（01版）、USA的ValidationofPharmaceuticalProcesses（3rdEdition,319-326）、PDA的TechnicalReportNo.22rocessSimulationTestingforAsepticallyFilledProducts（1996,50,S1）。

　　5.4縮寫與定義：PQ、PV、QA、QP、CGMP等。

　　5.5職責：生產(chǎn)、技術、質(zhì)量控制、質(zhì)量保證等在本培養(yǎng)基模擬灌裝試驗中的分工和職責。如質(zhì)量管理負責人職責為最終批準驗證過程中的偏差或變更；最終批準所有驗證方案；

　　最終批準所有驗證總結(jié)報告。

　　5.6實施和文件要求：按《驗證實施和記錄標準操作程序》實施本項驗證，收集和記錄相關信息和驗證結(jié)果。實施過程中如出現(xiàn)偏差或變更，或出現(xiàn)需要對方案進行修訂的情況，填寫“偏差表格”或“驗證方案修訂申請表”，并在“驗證方案修訂記錄表”中記錄本項驗證實施過程中發(fā)生的所有方案修訂。

　　5.7培訓確認/簽名表：記錄所有實施本方案相關工作的人員，確認所有人員在方案實施前均已接受適宜的培訓。所有實施本方案的人員，均須針對本方案和相應方法及相關SOP進行培訓，以正確實施和記錄相關工作。在實施方案前，在下表中登記姓名、部門名稱，并簽名和簽署日期。

　　5.8驗證前確認：一是文件：模擬灌裝涉及的操作均有規(guī)程指導，包括名稱，編號，版本號，生效日期等，確認實施前已生效。二是物料：如胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基、瓶子、膠塞、鋁蓋、過濾器，六種標準菌株白色念珠菌、黑曲霉、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌。三是設備和設施系統(tǒng)驗證情況確認：如空氣凈化系統(tǒng)、氣、汽系統(tǒng)、滅菌和除菌系統(tǒng)驗證、主要生產(chǎn)設備驗證。

　　5.9培養(yǎng)基性能試驗

　　5.9.1培養(yǎng)基無菌性能試驗：取模擬灌裝過程中經(jīng)第二道除菌過濾器過濾后初期的培養(yǎng)基溶液100g和灌裝結(jié)束后分液器及針頭殘留溶液用潔凈容器收集100g，送至潔凈室的超凈臺，將培養(yǎng)基以5ml/支的裝量裝入各20支已滅菌的試管中，各用作培養(yǎng)基無菌性能試驗樣品。（注意過濾初期的培養(yǎng)基不得廢棄）。培養(yǎng)管先在20-25℃條件下培養(yǎng)7天，再在30-35℃條件下培養(yǎng)7天，觀察菌落生長情況。培養(yǎng)14天后無微生物生長才算通過。

　　5.9.2培養(yǎng)基微生物生長性能試驗：取模擬灌裝過程中經(jīng)第二道除菌過濾器過濾后初期的培養(yǎng)基溶液100g，送至潔凈室的超凈臺，將培養(yǎng)基以5ml/支的裝量裝入20支已滅菌的試管中，用作培養(yǎng)基生長性能試驗樣品。取10支每管裝量為5ml胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基樣品，分別接種菌液濃度為100-1000CFU/ml的菌懸液0.1ml的銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌各3支，另取1支不接種作為空白對照，30-35℃培養(yǎng)3天；取7支每管裝量為5ml胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基樣品，分別接種菌液濃度為100-1000CFU/ml的菌懸液0.1ml的白色念珠菌、黑曲霉菌液各3支，另取1支不接種作為空白對照，20-25℃培養(yǎng)5天。判斷標準是空白對照管應無菌生長，加菌的培養(yǎng)基管內(nèi)菌落均生長良好且菌落形態(tài)與所加菌種相符，則該培養(yǎng)基可使用，否則換用其他培養(yǎng)基。

　　5.10模擬灌裝安排

　　一是生產(chǎn)安排，確定灌裝批量，灌裝時使用多少ml注射劑瓶及相應膠塞，每瓶樣品灌裝多少量的培養(yǎng)基溶液，灌裝培養(yǎng)基樣品分別裝載在凍干機的哪些板層，培養(yǎng)基灌裝的持續(xù)時間至少達到多少小時。灌裝機按規(guī)定速度進行培養(yǎng)基灌裝。模擬整條生產(chǎn)線正常生產(chǎn)過程中的所有活動。

　　二是關鍵功能操作間同時容納最多人數(shù)的確定，如軋蓋間、清洗間、滅菌間、稱量間、工衣清洗干燥間、洗烘瓶、消毒劑配制、灌裝、凍干前室、配料間等各安排多少人。

　　三是最差工況的確定，我列幾個主要的如下：

　　1、灌裝間的人員在灌裝期間至少2小時內(nèi)達到房間額定的最大人數(shù)（如9人），其他時間（吃飯時間除外）不少于4個人（實際灌裝操作需4人）。

　　2、滅菌后注射劑瓶、膠塞敞口暴露或暴露在RABS內(nèi)的時間達到或超過工藝規(guī)定最大時間。

　　3、配制開始至第一道過濾結(jié)束持續(xù)時間，模擬工藝規(guī)定最長間隔時間。

　　4、模擬灌裝用膠塞、鋁蓋盡量滅菌后存儲大于72小時后再用于灌裝。

　　5、灌裝機和進出料系統(tǒng)需打開RABS門的干擾事件。如需打開RABS門處理的倒瓶、炸瓶（需開門和不開門處理的炸瓶事件均包括在內(nèi)）、需打開門處理的膠塞堵塞，需打開門處理的灌裝機裝量調(diào)整、培養(yǎng)碟放置更換、需打開門處理的灌裝針頭排汽泡、需要打開門抽查裝量及可見異物。

　　6、模擬使用無菌風險最差的板層進行裝載產(chǎn)品進行模擬凍干。

　　7、軋蓋機和進出料系統(tǒng)需要打開RABS門處理的干擾事件。如需打開RABS門處理的鋁蓋震蕩斗卡堵、軋蓋工位卡瓶、反瓶、卡蓋、炸瓶、停機。

　　8、灌裝機出現(xiàn)故障，維修人員進入灌裝間維修。如模擬灌裝機運行不正常，打開操作屏處電控柜柜門，檢查線路、元件后，關上電控柜柜門，每次維修時間約30-60分鐘。

　　9、每批灌裝持續(xù)時間不少于實際操作多少個小時。

　　10、凍干機滅菌后最長使用周期。工藝允許在相同產(chǎn)品連續(xù)生產(chǎn)過程中，凍干機滅菌后的最長使用周期為第N天開始使用，間隔時間為N-1天。

　　5.11模擬程序

　　一是人員、環(huán)境、物料監(jiān)控。按照日常監(jiān)測方法對各區(qū)域的人員、空氣系統(tǒng)進行監(jiān)測，并將監(jiān)測數(shù)據(jù)相關文件作為附件附在激素凍干粉針生產(chǎn)線模擬無菌灌裝試驗驗證報告中。特別是模擬灌裝過程對進入B級區(qū)的所有操作人員均需進行監(jiān)控，主要操作人員每次進入B級區(qū)的人員離開退出時，頭、口罩、胸部、肩部、手指、手肘、膝蓋對其取樣進行表面微生物監(jiān)控。

　　二是注射劑瓶、膠塞和鋁蓋處理。記錄試驗用膠塞及鋁蓋滅菌結(jié)束時間，試驗用膠塞及鋁蓋的領用時間，并計算二者間隔，試驗需要膠塞及鋁蓋滅菌后儲存至少72小時方可用于模擬灌裝使用。

　　三是注射劑瓶、膠塞無菌檢查。模擬灌裝試驗過程中，取部分已滅菌膠塞、已除熱原注射劑瓶敞口暴露于A級區(qū)域，記錄放置起始時間、放置結(jié)束時間，計算時間間隔，同時分別將部分模擬灌裝結(jié)束后的物料進行無菌檢查，其余物料用于正常模擬灌裝并區(qū)別，檢查結(jié)果記錄于“滅菌后膠塞、除熱原后劑瓶敞口放置時間檢查表”中。

　　四是灌裝器具滅菌處理。模擬灌裝試驗過程中，記錄灌裝用具滅菌結(jié)束時間，開始使用時間；記錄并計算相應的時間間隔，由于過程模擬時間較長，且前期均做過相關確認，故模擬灌裝過程中每年至少模擬一次。

　　五是凍干機滅菌處理。模擬灌裝試驗過程中，記錄凍干機滅菌日期至模擬灌裝生產(chǎn)時使用日期；并計算相應的時間間隔，由于過程模擬時間較長，且前期均做過相關確認，故模擬灌裝過程中每年至少模擬一次。

　　六是培養(yǎng)基的配制及處理。

　　l按每批如2萬瓶以上瓶產(chǎn)品的模擬灌裝量，計算配制量。

　　l通過無菌氮氣壓濾將培養(yǎng)基溶液經(jīng)第一道除菌過濾器過濾至無菌存儲罐。培養(yǎng)基溶液第一道過濾結(jié)束至第二道過濾開始間隔時間在N小時以內(nèi)。

　　l通過無菌氮氣壓濾，將培養(yǎng)基從無菌儲存罐經(jīng)第二道過濾器過濾后送至灌裝機上的緩沖罐，進行灌裝操作，當灌裝瓶數(shù)可以分別裝滿兩個凍干箱各一個板層即約N瓶時，停止對無菌儲存罐和緩沖罐內(nèi)剩余培養(yǎng)基溶液的灌裝。這一階段中所有正常生產(chǎn)過程中的操作，如取樣、過濾器完整性試驗等也按實際生產(chǎn)進行模擬。

　　l在灌裝開始前取經(jīng)第二道除菌過濾器過濾后灌裝開始前的培養(yǎng)基溶液約100g，用于培養(yǎng)基無菌性能試驗，并計算物料平衡。

　　l藥液從配制開始到第一道過濾結(jié)束間隔時間驗證：按照《配料系統(tǒng)操作規(guī)程》使用配料系統(tǒng)配制胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基溶液。稱量Ng胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基在NL的桶中初步溶解后，再倒入混合罐中加水定容至Nkg攪拌混合均勻，模擬中間體檢驗結(jié)果等待，從配制開始即培養(yǎng)基開始溶解至第一道過濾結(jié)束應不少于4小時。模擬回收配料第二道跨接管剩余培養(yǎng)基，經(jīng)兩道過濾后進行灌裝，回收后灌裝產(chǎn)品與其他產(chǎn)品一起培養(yǎng)。

　　l將培養(yǎng)基溶液配制及藥液模擬回收時間記入“配制開始到第一道過濾結(jié)束間隔時間驗證記錄表”中。

　　七是無菌灌裝

　　l培養(yǎng)基模擬灌裝批生產(chǎn)的灌裝間人員：在生產(chǎn)結(jié)束人員將退出B級區(qū)時做微生物接觸碟取樣，通過表面微生物監(jiān)測結(jié)果和培養(yǎng)基模擬試驗的最終結(jié)果，確認可進行無菌生產(chǎn)的操作人員資質(zhì)，沒有按照要求參加培養(yǎng)基灌裝的人員不能直接參與實際生產(chǎn)。

　　l灌裝班人員交接班工況：模擬灌裝試驗過程中，模擬灌裝班人員換班操作2次，記錄每次換班時間及人員，每批兩次，其中進、出≥2次。檢查結(jié)果記錄于“灌裝班人員交接班記錄表”中。

　　l模擬灌裝過程安排：按灌裝操作程序，將膠塞加入料斗內(nèi)，注射劑瓶進入灌裝機，過濾后培養(yǎng)基溶液送至灌裝機上緩沖罐后，啟動灌裝機進行灌裝進箱、模擬凍干、軋蓋；軋蓋后樣品輸送至目檢工序進行目檢。培養(yǎng)基第二道過濾開始至進料結(jié)束持續(xù)時間不小于N小時（包括交接班換班吃飯時間，模擬維修時間，空轉(zhuǎn)時間）。灌裝過程所有的正常操作如稱重、檢查、取樣等都應模擬進行，灌裝過程模擬檢查可見異物和裝量差異的樣品，樣品需無菌壓塞后再模擬檢查，檢查結(jié)束后的樣品，若無破裂和損壞，則均應隨模擬灌裝產(chǎn)品一起進行培養(yǎng)，同時做好標記。

　　l打開/不打開RABS干擾事件工況：模擬灌裝試驗過程中，根據(jù)日常生產(chǎn)實際所發(fā)生的情況及次數(shù)，模擬灌裝、軋蓋RABS開門/不開門發(fā)生的干擾事件，并實時記錄干擾事件發(fā)生時間及類型，檢查結(jié)果記錄于“打開/不打開RABS干擾事件統(tǒng)計表”中，干擾事件分別記錄于“灌裝過程打開RABS門干擾事件A記錄表”“灌裝過程不開RABS門干擾事件B記錄表”“出箱軋蓋過程開RABS門干擾事件C記錄表”“出箱軋蓋過程不開RABS門干擾事件D記錄表”。

　　l灌裝機故障維修工況：模擬灌裝試驗過程中，模擬灌裝故障維修，如每批模擬灌裝模擬兩次維修，第一次模擬灌裝機瓶子在出料星輪處堵塞，出料星輪離合器過載，移除堵塞的瓶子，重新將星輪安裝調(diào)整至合適的位置，維修時間約40分鐘；第二次模擬灌裝機運行不正常，打開灌裝機機臺下維修柜門，檢查線路、部件后，關上維修柜門，維修時間約30分鐘。

　　l灌裝時間確認：工藝規(guī)程規(guī)定每批產(chǎn)品灌裝從第二道除菌過濾開始至灌裝結(jié)束時間應≤N小時。在模擬灌裝試驗過程中，記錄模擬灌裝從第二道除菌過濾開始至灌裝結(jié)束時間，檢查結(jié)果記錄于“灌裝時間記錄表”中。

　　l凍干操作：按照以下程序模擬樣品在凍干箱內(nèi)的狀態(tài)：灌裝制品N℃進箱，冷凍制品→放置樣品的隔板溫度均降至約N℃→冷阱溫度降至-N℃以下→凍干箱抽真空約Nmbar→打開放氣閥放氣→加熱隔板→隔板溫度升至N℃→凍干箱抽真空約Nmbar→全壓塞→打開放氣閥放氣→樣品出箱。

　　l出箱、軋蓋：出箱后凍干箱的樣品需收集，每個收集樣品的中轉(zhuǎn)盤上需標明收集序號。收集軋蓋后的樣品，目檢后培養(yǎng)時將樣品一半正立放置、一半倒立放置。記錄記錄出箱、軋蓋開始到出箱、軋蓋結(jié)束時間，確認出箱、軋蓋持續(xù)時間不少于12小時。

　　5.12模擬灌裝樣品檢查

　　一是灌裝制品培養(yǎng)前檢查：

　　l灌裝制品經(jīng)軋蓋后，包裝班人員在軋蓋出瓶軌道末端按順序接受樣品，并裝入中轉(zhuǎn)盤中，每個中轉(zhuǎn)盤上標記樣品接收序號。

　　由包裝目檢人員目檢瓶身破損及鋁蓋、膠塞密封等缺陷情況，若有缺陷品，則剔除缺陷品并記錄缺陷數(shù)量及缺陷原因。

　　目檢挑出的空瓶、破瓶、無塞中間產(chǎn)品作銷毀處理；

　　目檢挑出的松蓋、皺蓋、淺蓋、色點、裝量差異不合格中間產(chǎn)品在鋁蓋頂部標記并登記，按原順序放置于中轉(zhuǎn)筐或盤中與正常產(chǎn)品同樣條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)結(jié)束后檢查；

　　若目檢發(fā)現(xiàn)渾濁樣品，則記錄樣品的盤號及其在盤中的順序號，與正常產(chǎn)品同樣條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)周期結(jié)束后，送微生物室鑒別。

　　l目檢時上下顛倒振搖，保證培養(yǎng)基溶液與整個玻璃瓶和膠塞的內(nèi)表面充分接觸后，將灌裝制品按不同批號區(qū)分，按順序裝入不銹鋼盤或中轉(zhuǎn)筐。

　　二是灌裝制品的培養(yǎng)及檢查：

　　l培養(yǎng)：將灌裝制品按不同批號區(qū)分，同一批號不同板層的灌裝制品也需分開放置（小批號樣品一半正立放置、一半倒立放置），裝入中轉(zhuǎn)筐中，先置20-25℃培養(yǎng)7天，進行目檢，將正立轉(zhuǎn)成倒立，將倒立轉(zhuǎn)成正立，將再置30-35℃培養(yǎng)7天；記錄培養(yǎng)的起止時間，且灌裝制品培養(yǎng)期間每兩個小時至少記錄一次培養(yǎng)溫度至制品結(jié)束培養(yǎng)。在房間培養(yǎng)培養(yǎng)基樣品，房間四個角和中央處均放置一個溫度計，到達記錄時間點后記錄同一個房間內(nèi)每個溫度計顯示的溫度。將樣品的培養(yǎng)觀察結(jié)果記錄試驗批樣品培養(yǎng)觀察記錄”中。

　　l檢查：樣品在20～25℃下培養(yǎng)的7天、30～35℃培養(yǎng)的7天后，至少在第7天，第14天，由經(jīng)過QC微生物檢驗資質(zhì)人員的培訓的目檢人員（同時應當有QC現(xiàn)場指導）對培養(yǎng)后的制品的微生物生長情況進行檢查，并由QA人員對檢驗結(jié)果進行復核，若發(fā)現(xiàn)有被微生物污染的制品，應記錄瓶數(shù)、中間產(chǎn)品批號，并對菌種進行鑒別。

　　l陽性對照：在模擬灌裝的樣品培養(yǎng)14天結(jié)束后，每批隨機抽取培養(yǎng)基樣品N瓶（抽取的樣品需兼顧到每個板層的樣品），壓緊膠塞，送樣至檢驗室。檢驗室人員對樣品隨機分成五組，每組12瓶，每組分別接種銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉、生孢梭菌，接種量均為每瓶0.1ml濃度為100~1000cfu/ml的菌，然后進行培養(yǎng)。接種銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌的樣品在30-35℃培養(yǎng)3天，接種白色念珠菌、黑曲霉、生孢梭菌的產(chǎn)品在20-25℃培養(yǎng)5天。

　　5.13模擬灌裝物料平衡

　　l灌裝后培養(yǎng)基樣品丟棄記錄：

　　整個培養(yǎng)基灌裝過程中需要嚴格控制丟棄任何已經(jīng)灌裝的培養(yǎng)基,任何丟棄都要有充分的理由,并做好相應的記錄和解釋，只要符合最低灌裝量，就不應該丟棄。但如果是膠塞上位不正確的培養(yǎng)基，由于密閉系統(tǒng)不完整，必須進行丟棄。將灌裝、軋蓋、目檢、培養(yǎng)過程中分灌裝后培養(yǎng)基的丟棄記錄記入“灌裝后培養(yǎng)基樣品丟棄記錄表中。

　　l物料平衡計算：

　　配灌工序中間產(chǎn)品物料平衡；自動進出料、凍干、軋蓋工序中間產(chǎn)品物料平衡；目檢工序中間產(chǎn)品物料平衡。

　　5.14驗證標準及結(jié)果評定

　　一是驗證標準。培養(yǎng)基模擬灌裝應以不長菌為目標，并遵循以下規(guī)則：

　　l當灌裝數(shù)少于5000單位時，不得檢出污染；

　　l當灌裝數(shù)在5000-10000單位之間：

　　·出現(xiàn)一個污染單位，應進行調(diào)查，包括考慮重新進行培養(yǎng)基灌裝；

　　·出現(xiàn)兩個污染單位，應在調(diào)查后進行再驗證。

　　l當灌裝數(shù)在10000單位以上：

　　§出現(xiàn)一個污染單位應進行調(diào)查；

　　§出現(xiàn)兩個污染單位，應在調(diào)查后進行再驗證。

　　二是結(jié)果評定：結(jié)果均應達到不長菌的目標，任何一次超過規(guī)定，且長菌的樣品不是因為容器的破損造成的，則驗證無效，應查明污染產(chǎn)生的原因，方可判斷此灌裝工藝過程符合無菌灌裝要求。

　　5.15驗證周期

　　l培養(yǎng)基模擬灌裝試驗每半年進行一次；

　　l生產(chǎn)工藝變更、重要技術參數(shù)改變時、班次數(shù)有重要的變更后或關鍵設備更換、大修、變更安裝位置等，須根據(jù)評估結(jié)果重新進行再驗證。

　　5.16驗證計劃實施情況確認

　　5.17工藝驗證合格標準總結(jié)

　　審核該已實施的培養(yǎng)基模擬灌裝試驗，并確認所有的標準均已達到。如果方案有任何未完成項目，請說明。

　　5.18方案修改

　　按驗證實施和記錄標準操作程序，在驗證實施過程中如出現(xiàn)需要對方案進行修訂的情況，填寫“驗證方案修訂申請表”，并在“驗證方案修訂記錄表”中記錄本項驗證實施過程中所作的每一項方案修訂。

　　5.19方案偏差

　　按驗證實施和記錄標準操作程序，在驗證實施過程中如出現(xiàn)偏差或變更，填寫“偏差表格”對偏差進行調(diào)查和處理。

　　5.20附錄

　　將所有驗證方案適用的數(shù)據(jù)和資料附在附件內(nèi)。當添加資料/數(shù)據(jù)到附錄部分時，請按表填寫，并注明附錄中的頁數(shù)，若添加頁沒有編頁碼的，手動添加。

　　三、模擬灌裝試驗的問題討論（共八個問題）

　　1、2015版中國藥典需氧菌和真菌無菌檢查改為胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB），模擬灌裝試驗的培養(yǎng)基要改嗎？

　　答：不需要改。一般選廣譜的胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB），真菌、細菌都能長。如果以往產(chǎn)品有過厭氧成長，可以用硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基（FTM）模擬，同樣條件去做模擬灌裝試驗，厭氧培養(yǎng)基一般會分層，上層用于隔絕下層的空氣層導致厭氧菌在上層不長。厭氧菌要長也是在下層，但因有些瓶子不大，如2ml或5ml瓶子無法造出隔絕空氣層，因模擬陽性菌瓶也是不長的，所以，既使有厭氧菌也難以存活，故大多企業(yè)是沒有做厭氧培養(yǎng)基的模擬灌裝試驗。

　　2、指南征求稿中關于培養(yǎng)時間至少14天，一般采用先在20-25℃最少培養(yǎng)7天，然后在30-35℃的范圍繼續(xù)培養(yǎng)7天。也可采用單一的20-35℃的培養(yǎng)條件，但應有相關的數(shù)據(jù)證明培養(yǎng)條件有利于微生物的生長。一是能否先30-35℃后20-25℃培養(yǎng)？二是采用單一的20-35℃培養(yǎng)怎么操作？

　　答：第一個問題：就是先低溫真菌培養(yǎng)、再高溫細菌培養(yǎng)，因擔心有些低溫菌先高溫30-35℃培養(yǎng)會被殺死。另外，真菌相對細菌生長得慢，所以先培養(yǎng)真菌7天，后面還有7天的時間可繼續(xù)長。而細菌生長得快，一般3天就能看出大致，所以可以后培養(yǎng)。

　　第二個問題：培養(yǎng)基灌裝的培養(yǎng)溫度，可以在做完培養(yǎng)基的促成長試驗后，選擇一個20-35℃的溫度進行培養(yǎng)，但培養(yǎng)箱的溫度要控制在正負2.5℃。

　　3、什么是培養(yǎng)基模擬灌裝試驗的“最差條件”？（轉(zhuǎn)摘自醫(yī)藥微學堂，文章由四川蜀陽周珍字提供）

　　答：2010版藥品GMP指南：在培養(yǎng)基灌裝設計中，工藝條件的選擇應選取合理的“最差條件”，用最差條件來對工藝流程、設備和整個體系進行挑戰(zhàn)。如果在最差條件下能獲得好結(jié)果，說明在比最差情況要好的實際生產(chǎn)中，無菌保證的可靠性更有保證。“最差條件”考慮如下三個方面：

　　一是設施、設備、包材和輔料清潔、滅菌后存放時間：

　　二是灌裝人員及參數(shù)設定：

　　三是干擾項目的設計：

　　模擬實際生產(chǎn)過程中出現(xiàn)的各種類型的常規(guī)性干擾和非常規(guī)性干擾。在每半年的培養(yǎng)基灌裝前應對上一階段的生產(chǎn)狀況進行總結(jié)和趨勢分析，綜合考慮有代表性的活動及干預，將其干擾類型與頻次列入方案中。從人、機、料、法、環(huán)、測各方面綜合考慮，組合出最具有代表的“最差條件”。

　　4、人員重大變更，是否需要進行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗才能正式上崗？

　　答：無菌藥品附錄中第47條：培養(yǎng)基模擬灌裝試驗的首次驗證，每班次應當連續(xù)進行3次合格試驗?？諝鈨艋到y(tǒng)、設備、生產(chǎn)工藝及人員重大變更后，應當重復進行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗。培養(yǎng)基模擬灌裝試驗通常應當按照生產(chǎn)工藝每班次半年進行1次，每次至少一批。人員重大變更，肯定需要重新進行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗，只有參加過模擬灌裝試驗的人員，才可以進入到核心灌裝區(qū)進行正常產(chǎn)品生產(chǎn)的操作。

　　5、在培養(yǎng)基模擬灌裝結(jié)束后，在培養(yǎng)時，是否所有的西林瓶都要倒置培養(yǎng)，還是只需要部分的倒置培養(yǎng)即可？

　　答：只要培養(yǎng)基與西林瓶所有接觸面接觸過就可以，無論正立、倒立或平放。行內(nèi)有三種做法：一是培養(yǎng)基模擬灌裝結(jié)束，正常的培養(yǎng)，不需要倒置，培養(yǎng)基培養(yǎng)期間，瓶子里的任何表面都要被培養(yǎng)基接觸到，翻轉(zhuǎn)幾次就可以了；二是將培養(yǎng)液與西林瓶和膠塞充分接觸，然后一半倒立培養(yǎng)、一半正立培養(yǎng)；三是將培養(yǎng)液與西林瓶和膠塞充分接觸，在20-25度正立培養(yǎng)7天，30-35度倒立培養(yǎng)7天。指南征求稿中是第一種，就是培養(yǎng)前，對模擬灌裝產(chǎn)品進行顛倒、輕搖以使培養(yǎng)基接觸所有內(nèi)表面，再正立培養(yǎng)，開始培養(yǎng)后不應再進行反轉(zhuǎn)等干擾。我們是第二種和第三種的混合，如先將灌裝制品按不同批號區(qū)分，同一批號不同板層的灌裝制品也需分開放置（小批號樣品一半正立放置、一半倒立放置），裝入中轉(zhuǎn)筐中，先置20-25℃培養(yǎng)7天，進行目檢，將正立轉(zhuǎn)成倒立，將倒立轉(zhuǎn)成正立，將再置30-35℃培養(yǎng)7天。

　　6、如何判斷哪些灌裝樣品不需要進行培養(yǎng)？

　　答：包括破損，影響到密封性的樣品；完整性測試（泄漏測試）失敗的樣品；文件中明確規(guī)定予以丟棄的中控測試樣品；設備自動剔除的樣品；文件中明確規(guī)定，每次干擾后應予手工剔除的樣品（規(guī)定應詳細、明確，并需證明其可操作性和穩(wěn)定可信性）。另外，剔除的樣品應進行記錄注明丟棄原因。

　　7、在培養(yǎng)基灌裝試驗中，是否必須進行錄像？錄像的保存期需要多長？

　　答：不是必需的，錄像僅是一種可選的輔助調(diào)查和培訓手段。如果采用了錄像措施，也僅作為公司內(nèi)部的資料（如同內(nèi)部審計報告），不必向檢查員出示。公司應有文件規(guī)定，什么情況下要進行錄像，錄像的儲存時間等。

　　8、是否可在培養(yǎng)基模擬灌裝試驗中模擬停電的狀況？

　　答：不允許。停電后，核心灌裝區(qū)的AB級無法保證無菌性，如果可以模擬，還要A級監(jiān)測相關指標做什么？一旦A級沒電，沒有層流保護，無菌狀態(tài)被破壞了，即使你無菌檢測是合格的，畢竟檢測只是僅有代表性，有其無菌檢測局限性。不能以培養(yǎng)基模擬灌裝試驗中模擬停電為產(chǎn)品放行為借口，可考慮A級有UPS或22S內(nèi)迅速轉(zhuǎn)供電也是可以的。