1.試劑配制

　　試劑1：5g茚三酮溶解到100ml乙醇中

　　試劑2：80g苯酚溶解到20ml乙醇中

　　試劑3：2ml0.001MKCN加入到98ml重蒸吡啶中

　　關(guān)于試劑的配制有幾點(diǎn)注意事項(xiàng)：

　　茚三酮和苯酚不是太好溶，尤其是苯酚，溶解時(shí)應(yīng)注意。氰化鉀在顯色反應(yīng)中起到催化作用，如有劇毒試劑氰化鉀不好搞到的話可以不加。重蒸吡啶時(shí)最好在吡啶中加入一定量的茚三酮，在重蒸過(guò)程中可以除去吡啶中使茚三酮變色的物質(zhì)。

　　配置好的茚三酮溶液應(yīng)避光保存。

　　2.檢測(cè)操作

　　取少量樹(shù)脂于小玻璃管或小子彈頭中，用DCM或者乙醇多次洗滌樹(shù)脂，過(guò)濾除去洗滌液，加入上述每種試劑2-5滴，混勻。100℃下加熱5分鐘。觀察顯色結(jié)果。

　　關(guān)于檢測(cè)操作的注意事項(xiàng)：

　　樹(shù)脂不要取太多，KT檢測(cè)很靈敏，取太多的話會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。用DCM洗滌的話洗滌液一定要濾干凈，否則加熱過(guò)程中樹(shù)脂會(huì)噴出。加熱時(shí)間應(yīng)該控制好，時(shí)間過(guò)短可能會(huì)造成假陽(yáng)性（游離氨基還未反應(yīng)顯色）。加熱時(shí)間過(guò)長(zhǎng)氨基酸的Fmoc保護(hù)基和賴氨酸的Boc側(cè)鏈保護(hù)基會(huì)掉，出現(xiàn)假陰性結(jié)果。

　　3.顯色結(jié)果

　　KT檢測(cè)是針對(duì)游離氨基的一種靈敏的檢測(cè)方法，當(dāng)有游離氨基存在時(shí)，檢測(cè)結(jié)果為藍(lán)色。如在固相合成中脫除Fmoc保護(hù)基后檢測(cè)樹(shù)脂，會(huì)觀察到不透明的深藍(lán)色。特殊的氨基酸殘基會(huì)顯示出別的顏色，如脯氨酸，其仲氨基顯紅色。Asp,Asn,Cys,Ser,和Thr會(huì)顯示出紅棕色（比脯氨酸顏色深，容易觀察）。當(dāng)沒(méi)有游離氨基存在時(shí)，檢測(cè)結(jié)果顯黃色或無(wú)色，如固相合成是氨基酸偶聯(lián)完全，沒(méi)有游離氨基，次時(shí)檢測(cè)顯示出黃色或無(wú)色。所以可以用這種方法定性判斷偶聯(lián)反應(yīng)終點(diǎn)。

　　脯氨酸

　　4.四氯苯醌檢測(cè)

　　試劑配制

　　對(duì)于特殊的脯氨酸，可以使用四氯苯醌檢測(cè)，試劑配制方法如下

　　試劑1：2ml乙醛加入到98mlDMF中

　　試劑2：2g四氯苯醌加入到98mlDMF中

　　操作步驟

　　取少量樹(shù)脂用DCM或者乙醇洗滌，滴入上述試劑各兩滴，混合均勻，室溫靜置5min，若存在游離氨基，樹(shù)脂顯藍(lán)色。