1.試劑配制

　　試劑1：5g茚三酮溶解到100ml乙醇中

　　試劑2：80g苯酚溶解到20ml乙醇中

　　試劑3：2ml0.001MKCN加入到98ml重蒸吡啶中

　　關(guān)于試劑的配制有幾點注意事項：

　　茚三酮和苯酚不是太好溶，尤其是苯酚，溶解時應(yīng)注意。氰化鉀在顯色反應(yīng)中起到催化作用，如有劇毒試劑氰化鉀不好搞到的話可以不加。重蒸吡啶時最好在吡啶中加入一定量的茚三酮，在重蒸過程中可以除去吡啶中使茚三酮變色的物質(zhì)。

　　配置好的茚三酮溶液應(yīng)避光保存。

　　2.檢測操作

　　取少量樹脂于小玻璃管或小子彈頭中，用DCM或者乙醇多次洗滌樹脂，過濾除去洗滌液，加入上述每種試劑2-5滴，混勻。100℃下加熱5分鐘。觀察顯色結(jié)果。

　　關(guān)于檢測操作的注意事項：

　　樹脂不要取太多，KT檢測很靈敏，取太多的話會影響檢測結(jié)果。用DCM洗滌的話洗滌液一定要濾干凈，否則加熱過程中樹脂會噴出。加熱時間應(yīng)該控制好，時間過短可能會造成假陽性（游離氨基還未反應(yīng)顯色）。加熱時間過長氨基酸的Fmoc保護(hù)基和賴氨酸的Boc側(cè)鏈保護(hù)基會掉，出現(xiàn)假陰性結(jié)果。

　　3.顯色結(jié)果

　　KT檢測是針對游離氨基的一種靈敏的檢測方法，當(dāng)有游離氨基存在時，檢測結(jié)果為藍(lán)色。如在固相合成中脫除Fmoc保護(hù)基后檢測樹脂，會觀察到不透明的深藍(lán)色。特殊的氨基酸殘基會顯示出別的顏色，如脯氨酸，其仲氨基顯紅色。Asp,Asn,Cys,Ser,和Thr會顯示出紅棕色（比脯氨酸顏色深，容易觀察）。當(dāng)沒有游離氨基存在時，檢測結(jié)果顯黃色或無色，如固相合成是氨基酸偶聯(lián)完全，沒有游離氨基，次時檢測顯示出黃色或無色。所以可以用這種方法定性判斷偶聯(lián)反應(yīng)終點。

　　脯氨酸

　　4.四氯苯醌檢測

　　試劑配制

　　對于特殊的脯氨酸，可以使用四氯苯醌檢測，試劑配制方法如下

　　試劑1：2ml乙醛加入到98mlDMF中

　　試劑2：2g四氯苯醌加入到98mlDMF中

　　操作步驟

　　取少量樹脂用DCM或者乙醇洗滌，滴入上述試劑各兩滴，混合均勻，室溫靜置5min，若存在游離氨基，樹脂顯藍(lán)色。