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科學(xué)家利用基因編輯技術(shù)治療艾滋病

2018-05-25 來源:OFweek醫(yī)療科技網(wǎng)  標(biāo)簽: 掌上醫(yī)生 喝茶減肥 一天瘦一斤 安全減肥 cps聯(lián)盟 美容護(hù)膚
摘要:在共轉(zhuǎn)染前每個(gè)gRNA都被克隆進(jìn)CRISPRv2慢病毒中,從而創(chuàng)造了慢病毒載體并將之轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)入細(xì)胞。和沒有轉(zhuǎn)染以及轉(zhuǎn)染空載體的細(xì)胞相比,CRISPR/Cas9轉(zhuǎn)染穩(wěn)定表達(dá)Tat和Rev的293T和HeLa細(xì)胞后,細(xì)胞中的這兩個(gè)基因表達(dá)都被成功的抑制。

CRISPR/Cas9系統(tǒng)為編輯HIV-1病毒基因組提供了一種新的有潛力的工具。近日來自日本神戶大學(xué)醫(yī)學(xué)院感染疾病中心及健康科學(xué)研究生院國際衛(wèi)生系的研究人員設(shè)計(jì)了一種RNA引導(dǎo)的CRISPR/Cas9以靶向HIV-1調(diào)節(jié)基因tat和rev,其中的引導(dǎo)RNAs(gRNA)都基于CRISPR的特異性設(shè)計(jì),其靶向的序列在6種主要的HIV-1亞型中都保守存在。

在共轉(zhuǎn)染前每個(gè)gRNA都被克隆進(jìn)CRISPRv2慢病毒中,從而創(chuàng)造了慢病毒載體并將之轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)入細(xì)胞。和沒有轉(zhuǎn)染以及轉(zhuǎn)染空載體的細(xì)胞相比,CRISPR/Cas9轉(zhuǎn)染穩(wěn)定表達(dá)Tat和Rev的293T和HeLa細(xì)胞后,細(xì)胞中的這兩個(gè)基因表達(dá)都被成功的抑制。

Tat功能試驗(yàn)顯示轉(zhuǎn)染tat-CRISPR顯著抑制了HIV-1啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的熒光素酶的表達(dá),而Rev功能試驗(yàn)則顯示轉(zhuǎn)染rev-CRISPR后gp120的表達(dá)被完全抑制。Cas9剪切位點(diǎn)的靶基因出現(xiàn)高頻的各種程度的突變。值得注意的是,研究人員沒有檢測到任何非靶標(biāo)靶位點(diǎn)出現(xiàn)突變,同時(shí)Cas9的表達(dá)對(duì)細(xì)胞的活性沒有影響。

研究人員進(jìn)一步在HIV-1感染的T細(xì)胞系中測試了他們的CRISPR/Cas9系統(tǒng),結(jié)果發(fā)現(xiàn)就算進(jìn)行細(xì)胞因子再刺激,p24的表達(dá)也被顯著抑制,而同時(shí)使用6種gRNAs可以進(jìn)一步增強(qiáng)編輯效率。因此利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)靶向HIV-1調(diào)節(jié)基因也許是一種實(shí)現(xiàn)功能性治愈的有效方法。

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