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重組變異鏈球菌表面蛋白的可溶性表達(dá)及抗體制備

2015-08-17 來源:健客網(wǎng)社區(qū)  標(biāo)簽: 掌上醫(yī)生 喝茶減肥 一天瘦一斤 安全減肥 cps聯(lián)盟 美容護(hù)膚
摘要:該研究指出,rPAc高效可溶性表達(dá)和抗rPAc多克隆抗體的制備為DNA初次免疫—蛋白質(zhì)加強(qiáng)免疫策略的深入研究奠定了必要的物質(zhì)基礎(chǔ)。該文發(fā)表在2012年30卷03期《華西口腔醫(yī)學(xué)雜志》上。

   近日,杭州口腔醫(yī)院和口腔生物醫(yī)學(xué)工程教育部重點實驗室的研究人員共同發(fā)表基礎(chǔ)研究論文,旨在探討重組變異鏈球菌表面蛋白(rPAc)在大腸桿菌中可溶性表達(dá)的最佳誘導(dǎo)條件并制備其多克隆抗體。該研究指出,rPAc高效可溶性表達(dá)和抗rPAc多克隆抗體的制備為DNA初次免疫—蛋白質(zhì)加強(qiáng)免疫策略的深入研究奠定了必要的物質(zhì)基礎(chǔ)。該文發(fā)表在2012年30卷03期《華西口腔醫(yī)學(xué)雜志》上。

 
 
  通過改變pET20b(+)-AP/BL21(DE3)plysS工程菌的培養(yǎng)條件,提高rPAc可溶性表達(dá)水平。用純化的rPAc免疫BALB/c小鼠制備多克隆抗體,通過酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)和Westernblot法鑒定抗體的免疫學(xué)活性。
 
  pET20b(+)-AP/BL21(DE3)plysS工程菌在Luria-Bertani(LB)培養(yǎng)基(pH值為7.2)上培養(yǎng),至表示菌體密度的光密度值OD600nm=0.6時加入1.0mmol·L-1異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG),30℃誘導(dǎo)培養(yǎng)4h,rPAc的可溶性表達(dá)量最高。以純化的rPAc免疫BALB/c小鼠,制備抗rPAc多克隆抗體,ELISA法測定抗體效價為1:6000,Westernblot法鑒定出該抗體可特異性識別rPAc。
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