抗體（antibody）指機體的免疫系統(tǒng)在抗原刺激下，由B淋巴細胞分化成的漿細胞所產生的、可與相應抗原發(fā)生特異性結合反應的免疫球蛋白。1890年人類第一次利用血清注射治療疾病獲得成功，為現(xiàn)代醫(yī)學開創(chuàng)了一條新路，后來人類研究發(fā)現(xiàn)其有效成分為抗體，抗體技術的發(fā)展經(jīng)歷了以下四個階段：

第一代：雜交瘤單克隆抗體技術

第二代：嵌合抗體和人源化改造單克隆抗體技術；

第三代：全人源單克隆抗體技術；

第四代：天然全人源單克隆抗體技術；

不同抗體技術的優(yōu)缺點比較

本文對四代抗體技術的發(fā)展歷程和優(yōu)缺點做進一步介紹。

雜交瘤單克隆抗體

1975年，英國科學家Milstein和Kohler[1]發(fā)明了雜交瘤單克隆抗體技術，將小鼠脾臟中的B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合后得到的雜交細胞具有兩種親本細胞的特性，獲得既能夠分泌抗體又能夠無限傳代的雜交瘤細胞。

雜交瘤技術所產生的鼠單抗會引起人體明顯的副反應。主要表現(xiàn)在鼠抗體的FC不能激活人的效應系統(tǒng)，如抗體依賴性細胞介導的細胞毒作用（ADCC）和補體依賴的細胞毒作用（CDC）；鼠抗體作為異源蛋白進入人體，會激發(fā)人體免疫系統(tǒng)產生人抗小鼠抗體（HAMA）；異源蛋白在人體內清除很快，抗體半衰期短等。

嵌合抗體和人源化改造單克隆抗體技術

嵌合抗體（ChimericAntibodies）是由動物源性抗體的V區(qū)基因與人源抗體的C區(qū)基因拼接為嵌合基因，使抗體的70%成分都是人成分，然后插入載體，轉染細胞生產抗體[2-3]。人源化改造單克隆抗體(HumanizedAntibodies)是將動物源性抗體的CDR或者SDR[4]移植到人源抗體的骨架上，使抗體的90%成分都是人成分，人源化抗體可降低抗體的免疫原性，延長抗體藥物半衰期[5-6]。

無論嵌合抗體還是人源化抗體，其序列中依然存在動物源成分，依然會引起機體的免疫排斥，導致抗抗體的產生及藥物療效的大大降低。

全人源抗體

全人源抗體(all-HumanAntibodies)，是指組成抗體的氨基酸序列100%是來自于人的抗體。全人源抗體相比前面兩種抗體來講，免疫原性大大降低，安全性得到了很大的提高。目前主要的全人源抗體技術包括抗體庫展示技術和轉基因動物技術。

庫展示技術平臺，目前工業(yè)界發(fā)展較為成熟是噬菌體庫展示技術[7]，是將抗體基因序列插入到噬菌體外殼蛋白結構基因中，使抗體基因隨外殼蛋白的表達而表達（圖1）。CAT公司的全球首個全人源抗體Humira來自噬菌體展示技術，先篩選和靶抗原高效結合的抗體重鏈的可變區(qū)，再篩選和靶抗原高效結合的抗體輕鏈的可變區(qū)，將結合最好的抗體輕鏈重鏈重組表達成一個完整的抗體[8,9]。特點：人源成分100%，免疫原性大大降低，但其抗體輕鏈和重鏈可能存在不配對問題，并且抗體沒有經(jīng)過人體環(huán)境免疫耐受的選擇。

轉基因動物技術是將人類抗體重鏈和輕鏈的基因引入抗體基因缺陷的小鼠，使之擁有人類抗體基因，用抗原免疫該小鼠而獲得全人源抗體[10]，主要的研發(fā)企業(yè)包括Medarex、Abgenix、Regeneron、OMT、Kymab、TRIANNI,Inc.和Ablexis,LLC等。特點：人源成分100%，免疫原性大大降低，其缺點是所產生的抗體在小鼠體內成熟，沒有經(jīng)過人體環(huán)境免疫耐受的選擇，實際上是一種“鼠源化”人單克隆抗體，所以依然存在安全隱患。

天然全人源單克隆抗體技術

天然全人源抗體（Naturalall-Humanantibodies），是指抗體就是來自于天然的人的B細胞。天然全人源抗體主要技術包括人骨髓瘤細胞技術、B細胞永生化技術（EBV轉化B細胞克隆及其他細胞因子輔助B細胞克?。蝹€B細胞RT-PCR及單個B細胞測序等技術，這類技術是以從人體上的B細胞為起始點，最后得到單個B細胞所表達的有用的抗體。近年來以人單個B細胞克隆技術平臺為代表的第四代抗體技術嶄露頭角，盡管仍然存在各種各樣的問題，但是該技術領域正在發(fā)生日新月異的變化。如百健利用單個B細胞RT-PCR方法開發(fā)的天然全人源Aducanumab[11-12]，靶向寡聚的Amyloid-β，有望成為首個可以逆轉阿爾茨海默癥進程的藥物。

目前國內外掌握天然全人源單克隆抗體技術的公司有Aridis、iRepertoire、AIMM、Xbiotech、Humabs（VirBiotechnology子公司）、Neurimmune和Trinomab(中國,珠海)等幾家公司，其各自特點如表1所示：

Aridis公司的MabIgX-C技術

通過與其專利保護的骨髓瘤細胞進行細胞融合，開發(fā)周期較長，操作較繁瑣，效率較低下

單個B淋巴細胞的多重PCR，再結合NGS技術分離天然全人源抗體，開發(fā)成本較高

通過其專利保護兩種細胞因子BCL6和Bcl-xL引入記憶B細胞實現(xiàn)永生化，開發(fā)周期較漫長，操作較繁瑣，技術較為復雜

HUMABS公司（VirBiotechnology子公司）的CellClone技術

運用TLR和IL-6兩種細胞因子及EBV病毒使B細胞永生化，結合RT-PCR技術篩選抗體，開發(fā)周期較長

Xbiotech公司的TrueHuman?技術，Neurimmune公司的RTM?技術

利用傳統(tǒng)基因克隆從人的PMBC細胞中分離出抗體基因，再進行重組，開發(fā)周期較漫長，操作較繁瑣

利用分選的單個漿細胞或抗原特異性B細胞RT-PCR技術，結合線性化克隆技術，高效快速分離天然全人源抗體

泰諾麥博（Trinomab）公司的核心天然全人源單克隆抗體技術平臺（HitMab?）。該技術平臺生產的單克隆抗體是真正的天然全人源單克隆抗體，其主要技術路線如圖2所示：收集志愿者PBMC，通過流式分選單個B細胞，進行單個B細胞培養(yǎng)，構建線性表達系統(tǒng)，最后對重組抗體進行驗證。整個實驗流程實現(xiàn)了“高通量”、“高效率”和“可操作”，可快速獲得有效的天然全人源單克隆抗體。

天然全人源單克隆抗體的主要特點：不僅基因序列100%是人的，而且其親和力和特異性是經(jīng)過人體的免疫耐受環(huán)境下選擇而成熟的，以人免疫耐受為指導進行表位選擇，理論上對人體自身無免疫原性，抗體重鏈和輕鏈是天然原生配對組合，稱之為天然全人源抗體。毫無疑問，天然全人源抗體，將在臨床應用上給予患者最大的安全性保證。