癌癥特異性單克隆抗體是抗癌療法研發(fā)歷史中最成功的藥物之一。癌癥特異性抗體不僅可以作為單獨(dú)的活性藥物作用于靶向癌細(xì)胞，也可以作為運(yùn)輸機(jī)器將藥物運(yùn)送到特定的位點(diǎn)。然而目前已知的癌癥特異性靶點(diǎn)還知之甚少，許多癌癥靶點(diǎn)還在研究中。

　　根據(jù)已有的信息，目前市場(chǎng)上一共有19種癌癥抗體類藥物，其中兩種已經(jīng)在今年1月份進(jìn)入了首次常規(guī)檢查程序。這19種單抗中有7種針對(duì)血液惡性腫瘤，12種用于治療實(shí)體瘤。前者針對(duì)的靶點(diǎn)蛋白有四類，分別是：CD19,CD20,CD30以及CCR4，后者中有六種抗體直接針對(duì)癌細(xì)胞表面分子（主要是EGF-R與HER2），而剩下的單抗主要用于喚醒宿主的癌癥特異性免疫反應(yīng)，比如CTLA-4以及PD-1抗體，以及抑制癌癥的血管生成，比如VEGF抗體?？傊?，目前得到批準(zhǔn)的癌癥單克隆抗體覆蓋面太窄，而且特異性也不夠強(qiáng)。

　　這一不足或許是由于目前的靶點(diǎn)篩選方法導(dǎo)致的。比如通過(guò)尋找癌組織與正常組織中DNA，RNA以及蛋白質(zhì)的差異尋找合適的靶點(diǎn)。目前我們極大地依賴于體外的癌細(xì)胞系或者臨床樣本進(jìn)行靶點(diǎn)的篩選，然而體外的癌細(xì)胞系與體內(nèi)環(huán)境中的腫瘤在很多表面分子的表達(dá)水平方面是存在明顯差異的，而這些差異我們并不十分清楚；臨床樣本雖然可以提供相對(duì)真實(shí)的信息，但無(wú)奈數(shù)量太少，我們無(wú)法依靠其進(jìn)行常規(guī)的篩選實(shí)驗(yàn)。

　　此外，在高通量基因組學(xué)與蛋白組學(xué)研究中，一系列前期步驟極大地破壞了原本癌細(xì)胞的組織結(jié)構(gòu)。雖然在體外檢測(cè)中我們必須放棄腫瘤的復(fù)雜結(jié)構(gòu)才能獲得分子水平的信息，然而這些結(jié)構(gòu)反映了腫瘤在體內(nèi)的真實(shí)環(huán)境。腫瘤是一類復(fù)雜的組織結(jié)構(gòu)，除了癌細(xì)胞本身之外，還包括多種非癌細(xì)胞，比如表皮細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞，免疫細(xì)胞等。另外，還有許多可溶性地細(xì)胞因子充斥在腫瘤的微環(huán)境中。除此之外，腫瘤內(nèi)部還有大量的血管系統(tǒng)存在，它們實(shí)際上也可以作為穩(wěn)定的腫瘤靶點(diǎn)進(jìn)行研究（腫瘤內(nèi)部的血管，無(wú)論其結(jié)構(gòu)還是功能，都是異于正常組織的。這些血管系統(tǒng)可以營(yíng)造局部的高血壓，引起局部缺氧與再灌注，導(dǎo)致抗體的浸入受限）。然而這些信息在我們目前的方法中均被忽視了。

　　很長(zhǎng)時(shí)間以來(lái)，研究者們均花費(fèi)大量時(shí)間在腫瘤本身的研究，而忽視了腫瘤的微環(huán)境，最近這一現(xiàn)象得到了改觀。很多研究開始注意腫瘤為環(huán)境對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響。

　　針對(duì)目前圍繞腫瘤微環(huán)境設(shè)計(jì)的特異性抗體身份有限，作者提出了一些基于抗體展示技術(shù)的新型研究手段，或許可以幫助我們加快研發(fā)的速度。

　　新型噬菌體-抗體篩選技術(shù)

　　目前已經(jīng)有一些人源抗體庫(kù)構(gòu)建出來(lái)，體外篩選某一特定純化抗原的抗體十分簡(jiǎn)便：只需幾輪的親和選擇便可以得到。通過(guò)優(yōu)化篩選條件還可以增強(qiáng)篩選效果。雖然抗體的天然屬性無(wú)法獲得，但體外篩選條件卻可以得到精確調(diào)控。比如可以設(shè)計(jì)一段特定的抗原構(gòu)象篩選得到特異性的抗原物質(zhì)，又或者可以加入一段競(jìng)爭(zhēng)性的抗原去除不想要的抗體類型。體外篩選技術(shù)可以克服體內(nèi)自然形成過(guò)程中出現(xiàn)的免疫耐受現(xiàn)象，得到針對(duì)高保守的抗原或者自體抗原的抗體。

　　然而，抗體的實(shí)際選擇過(guò)程要更為復(fù)雜一些。其中包括篩選針對(duì)整個(gè)細(xì)胞的抗體群，其中目標(biāo)靶點(diǎn)只是細(xì)胞所有表位的一部分，而且需要對(duì)異源的細(xì)胞群進(jìn)行統(tǒng)一篩選。這一手段效果不明顯，原因是非特異性的噬菌體顆粒背景過(guò)高，選擇往往偏向于高表達(dá)的表位類型以及多輪篩選后富集的往往是主導(dǎo)型的噬菌體克隆。在報(bào)道的篩選結(jié)果中，有一多半篩選到的抗體被證明能夠與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合。這些抗原表位均為高表達(dá)的分子，比如EGFR，DC44，HER2等。

　　一些研究發(fā)現(xiàn)了一些新的抗原表位，他們認(rèn)為需要利用新型的篩選技術(shù)找到那些低豐度的特征分子。其中包括正在開發(fā)的"表型篩選"技術(shù)等。

　　體外噬菌體篩選技術(shù)

　　組織切片法

　　當(dāng)任何組織離開其原本的生長(zhǎng)環(huán)境時(shí)，都會(huì)引起明顯的基因表達(dá)差異。因此，在利用細(xì)胞系鑒定得到腫瘤特異性分子標(biāo)記應(yīng)用到臨床上時(shí)要十分小心，而且我們?cè)诤Y選過(guò)程中要盡可能保證腫瘤組織的原生生長(zhǎng)環(huán)境。另外一個(gè)問(wèn)題是不同的腫瘤組織具有很強(qiáng)的異質(zhì)性，這也對(duì)靶點(diǎn)的篩選造成了困難。為了解決這些問(wèn)題，新型的噬菌體篩選技術(shù)被開發(fā)出來(lái)。首先需要介紹的是激光捕捉微切片（lasercapturemicrodissection,LCM），這項(xiàng)技術(shù)能夠從與噬菌體庫(kù)共培養(yǎng)的腫瘤組織中切出一小片細(xì)胞供后續(xù)的分析。LCM方法的關(guān)鍵在于切片的制備，這直接影響到最后的篩選結(jié)果。尤其是脫水步驟，這一步驟能夠嚴(yán)重地降低噬菌體顆粒的結(jié)合。

　　研究者們開發(fā)出了能夠兼容LCM與噬菌體活性的方法，比如在LCM之后快速凍干切片保證盡可能多的噬菌體顆粒的附著。

　　影-棍法

　　對(duì)于篩選針對(duì)腫瘤微環(huán)境中稀有的細(xì)胞亞群的一個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題是噬菌體顆粒接觸受到限制。為了解決這個(gè)問(wèn)題，S?rensen與Kristensen兩人開發(fā)出了針對(duì)單個(gè)細(xì)胞的抗體篩選技術(shù)。之所以稱之為"影-棍"是因?yàn)檫@一方法需要用到一個(gè)小圓盤粘在玻璃吸管的下方（很像曲棍球）。

　　這個(gè)裝置用于保護(hù)靶細(xì)胞在輻射殺傷過(guò)程中的影響。之后就可以順利進(jìn)行噬菌體的吸附操作了。這一方法對(duì)于低豐度的細(xì)胞類型抗體篩選十分有效果。

　　體內(nèi)噬菌體篩選技術(shù)

　　噬菌體-多肽篩選法

　　體內(nèi)的噬菌體篩選技術(shù)最大的好處在于不需要破壞原有的腫瘤微環(huán)境結(jié)構(gòu)。比如一類叫做avb3的整合素蛋白，它在體內(nèi)特異性高表達(dá)與腫瘤上皮細(xì)胞，而在體外的腫瘤細(xì)胞系中這一分子廣譜地高表達(dá)，因此如果僅靠體外篩選技術(shù)我們很容易錯(cuò)過(guò)這個(gè)非常好的分子標(biāo)記。

　　我們通過(guò)將噬菌體庫(kù)注入小鼠體內(nèi)，然后分析腫瘤組織內(nèi)部特異性附著的，同時(shí)又相對(duì)較少出現(xiàn)在其它正常組織中的噬菌體顆粒，就可以找到相應(yīng)的特異性靶點(diǎn)分子。

　　噬菌體-抗體篩選法

　　依靠噬菌體庫(kù)表達(dá)腫瘤特異性多肽，我們還可以在體內(nèi)尋找有效的特異性抗體。

　　此外，作者還介紹了結(jié)合體內(nèi)-體外的復(fù)合式篩選技術(shù)，在此不再贅述。