Semaphorin5A基因是Semaphorins家族成員，最初發(fā)現(xiàn)與中樞神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)，之后發(fā)現(xiàn)其與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)。而黑素瘤的黑素細(xì)胞來(lái)源于神經(jīng)嵴，早期已在黑素瘤細(xì)胞系A(chǔ)2058中檢測(cè)到Semaphorin5A的表達(dá)，但該基因的表達(dá)是否影響黑素瘤細(xì)胞增殖和侵襲轉(zhuǎn)移，還未證實(shí)。張莉等探討了慢病毒介導(dǎo)短發(fā)夾RNA（shRNA）沉默神經(jīng)導(dǎo)向分子5A（Semaphorin5A）基因?qū)盒院谒亓鯝375細(xì)胞系生物活性的影響。

　　針對(duì)Semaphorin5A設(shè)計(jì)2對(duì)shRNA引物及1對(duì)陰性對(duì)照引物，構(gòu)建慢病毒載體，轉(zhuǎn)染至人胚腎上皮HEK293T細(xì)胞系收獲慢病毒，利用慢病毒感染A-375細(xì)胞系并通過(guò)嘌呤霉素篩選，成功獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系，實(shí)驗(yàn)分為實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞（A375-shRNA1和A375-shRNA2）、陰性對(duì)照組細(xì)胞（A375-con）及空白對(duì)照組細(xì)胞（A375）。通過(guò)反轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）、Western印跡比較實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞、陰性對(duì)照組細(xì)胞及空白對(duì)照組細(xì)胞Semaphorin5AmRNA、蛋白表達(dá)水平的差異。噻唑藍(lán)（MTT）檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況；侵襲試驗(yàn)及劃痕試驗(yàn)比較轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞的侵襲運(yùn)動(dòng)能力。

　　結(jié)果顯示

　　Semaphorin5A成功轉(zhuǎn)染A375細(xì)胞后，經(jīng)嘌呤霉素篩選，成功獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)組A375-shRNA2細(xì)胞系及對(duì)照組A375-con。反轉(zhuǎn)錄PCR及Western印跡檢測(cè)，干擾后實(shí)驗(yàn)組A375-shRNA2較對(duì)照組A375-con、A375Semaphorin5A的轉(zhuǎn)錄水平及蛋白表達(dá)水平表達(dá)下調(diào)。MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，A375-con與A375細(xì)胞生長(zhǎng)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，A375-shRNA2細(xì)胞生長(zhǎng)明顯減慢，與A375和A375-con比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，A375-shRNA2劃痕處細(xì)胞無(wú)明顯遷移，劃痕未得到修復(fù)，而A375及A375-con劃痕處細(xì)胞最終幾乎將劃痕覆蓋。侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，A375組與A375-con組穿過(guò)的細(xì)胞數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而A375-shRNA2通過(guò)小室的細(xì)胞明顯少于A375及A375-con組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

　　同等培養(yǎng)條件下，慢病毒感染A37572h后細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)（×100）

　　本研究提示慢病毒介導(dǎo)shRNA沉默Semaphorin5A基因能使A375細(xì)胞中的Semaphorin5A有效下調(diào)，并抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)，降低細(xì)胞的侵襲以及運(yùn)動(dòng)能力。