血清補體溶解免疫復合物活性概述
在補體的CRA中,旁路激活途徑(AP)起主導作用,傳統(tǒng)激活途徑僅為促進作用。補體CRA的機制是,在補體與IC相互作用時,AP的C3轉(zhuǎn)化酶大量裂解C3,形成的大量C3b嵌入到抗原抗體的格子狀結(jié)構(gòu)中并牢固與抗體結(jié)合,使部分抗原抗體的結(jié)合鍵斷裂,較大的IC凝聚物變?yōu)檩^小的凝聚物,從而溶解于液相中。
血清補體溶解免疫復合物活性正常值
(1)酶-抗酶法:正常人CRA(X±SD)為0.38±0.12,正常參考范圍可以為X±2SD即0.14-0.62。
(2)放射免疫法:成人溶解率正常值為66.0±7.4%。
血清補體溶解免疫復合物活性臨床意義
患自身免疫病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風濕性關(guān)節(jié)炎、慢性活動性肝炎、腎小球腎炎等,補體裂解復合物的能力低下。補體系統(tǒng)正常可防止病理性IC的出現(xiàn)或使IC激活補體引起的炎癥損傷減輕。而補體的先天或后天缺陷及補體系統(tǒng)的激活受阻可能是病理性IC出現(xiàn)的重要原因。
血清補體溶解免疫復合物活性檢查方法
(1)酶-抗酶法:
①取HRP-抗HRP復合物0.2ml,加待測血清0.1ml,置尖底離心管,于37℃水浴1h,時時搖動混勻。
②加入PBS 1ml,3000r/min,離心15min。
③取上清0.5ml加底物溶液0.4ml,37℃ 1h呈色。加1mol/L NaOH 0.1ml終止反應(yīng),再加入PBS 3ml,測450nm吸光度。
④用PBS 0.1ml代替待測血清作為對照管調(diào)零。
(2)放射免疫法:
①試驗組:
A.用含Ca2+、Mg2+明膠巴比妥緩沖液1∶3稀釋待測血清45μ1,125I BSA-抗BSA復合物懸液5μl 37℃ 15min加冷PBS(pH7.2 0.15mol/L)1ml。
B.1800r/min離心20min,棄上清,用γ-閃爍計數(shù)儀測沉淀cpm。
②對照組:自然溶解,正常人混合血清56℃滅活30min取45μl。
正常溶解:正常人混合新鮮血清,取45μl。對照組所加其他試劑同實驗組。
血清補體溶解免疫復合物活性注意事項
酶-抗酶法:
(1)補體并非對所有抗原抗體復合物都溶解,只能溶解可溶性抗原(多糖、蛋白、半抗原等)形成的IC。
(2)其他注意事項同酶免疫技術(shù)節(jié)。