T8淋巴細胞亞群概述
T淋巴細胞表面有多種抗原,其中簇分化(CD)抗原分類甚多,這些抗原除了標記細胞的種類和分化階段外,同時也有一定的功能,或作為受體、黏附分子、信號傳遞成分等,可通過這些表面特征性抗原鑒別亞群。目前開展較多的是用抗分化抗原的單克隆抗體,如抗CD8單克隆抗體,對外周血單個核細胞進行檢測,根據(jù)出現(xiàn)陽性率,判定亞群分布。T淋巴細胞亞群是觀察機體細胞免疫水平的重要方法,對惡性腫瘤、自身免疫性疾病、免疫缺乏癥、血液系統(tǒng)疾病的診斷、治療及預后判斷有重要價值。T細胞亞群之間有相互制約和相互輔助的作用,任何一方的增多或減少皆影響另一亞群的形成失調。
T8淋巴細胞亞群正常值
20%~30%。
T8淋巴細胞亞群臨床意義
(1)降低:急性移植物抗宿主病(GVH)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、溶血性貧血、高免疫球蛋白E綜合征(高IgE綜合征)、類風濕性關節(jié)炎。
(2)升高:無丙種球蛋白血癥、病毒感染、慢性移植物抗宿主病(GVH)、結核病、真菌和原蟲感染。
T8淋巴細胞亞群檢查方法
(1)直接免疫熒光法
①取肝素抗凝外周血,用淋巴細胞分層液獲得單個核細胞,Hank液配成(1~2)×106細胞/ml。
②取1ml細胞懸液加入5ml塑料管中,離心2000r/min,2min,棄上清。
③加FITC-CD8 20μl,對照管加mIgG-FITC,4℃反應30min。
④Hank液洗2次,2000r/min,2min。
⑤流式細胞計分析。
(2)間接免疫熒光法
①分離PBMC,調至(1~2)×106細胞/ml。
②取1ml細胞懸液于5ml塑料管中,離心2000r/min,2min,棄上清。
③加抗CD8單克隆抗體100μl,對照管加抗體稀釋液或正常小鼠IgG,4℃反應30min。
④Hank液洗2次,離心2000r/min,2min,棄上清。
⑤加50μl FITC-IgG,4℃反應30min。
⑥Hank液洗2次,2000r/min,2min。
⑦滴片,熒光顯微鏡觀察或流式細胞計分析。
T8淋巴細胞亞群注意事項
同B細胞檢測。另外,由于間接免疫熒光技術所用的羊或兔抗鼠熒光抗體與部分白細胞表面發(fā)生非特異結合,以及Fc受體的非特異細胞反應和多克隆熒光抗體的結合放大效應,從而造成非特異陽性熒光細胞增多。而對FITC直標單克隆抗體來說,抗體成分、性質和結構上完全均一,只要不使蛋白質-FITC復合物上帶上過多的電荷,就不會產生非特異吸附。目前國外基本上是用直接免疫熒光法,流式細胞計來分析T細胞亞群的,由于該儀器價格昂貴,國內尚未普及應用。因而對一般臨床實驗室來說,用免疫熒光顯微鏡也能開展這項工作。