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酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)概述

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是一種酶聯(lián)免疫技術(shù)。用于檢測(cè)包被于固相板孔中的待測(cè)抗原(或抗體)。即用酶標(biāo)記抗體,并將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面,使抗原抗體反應(yīng)在固相載體表面進(jìn)行,用洗滌法將液相中的游離成分洗除,最后通過(guò)酶作用于底物后顯色來(lái)判斷結(jié)果。顏色反應(yīng)的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應(yīng)可通過(guò)ELISA檢測(cè)儀進(jìn)行定量測(cè)定,這樣就將酶化學(xué)反應(yīng)的敏感性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來(lái),使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測(cè)方法。
 

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)正常值

  • 體內(nèi)菌群的種類(lèi)和比例正常,人體處于動(dòng)態(tài)平衡健康狀態(tài)。 

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)臨床意義

  • 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是酶免疫測(cè)定技術(shù)中應(yīng)用最廣的技術(shù)。常用的 ELISA 法有雙抗體夾心法和間接法,前者用于檢測(cè)大分子抗原,后者用于測(cè)定特異抗體。
    在寄生蟲(chóng)病方面,它用于對(duì)瘧原蟲(chóng)、阿米巴、利日曼原蟲(chóng)、錐蟲(chóng)、血吸蟲(chóng)、囊蟲(chóng)、弓漿蟲(chóng)、肺吸蟲(chóng)、肝吸蟲(chóng)、血絲蟲(chóng)、旋毛蟲(chóng)病等血清學(xué)診斷,這對(duì)人醫(yī)和獸醫(yī)都很重要。在病原微生物方面已用于檢查鏈球菌、沙門(mén)氏菌、布氏桿菌、結(jié)核桿菌、麻瘋桿菌、霍亂弧菌、淋球菌、假絲酵母菌等的抗體,還可用于破傷風(fēng)抗毒素和霍亂弧菌抗毒素的測(cè)定以及檢測(cè)斑疹傷寒立克次氏體感染后的抗體,可作診斷。對(duì)立克次氏體還可用以鑒別密切有關(guān)的種屬。也有用于檢查鸚鵡熱衣原體抗體的報(bào)導(dǎo)。試用于病毒抗體檢查報(bào)告的有流感病毒、腮腺炎病毒、麻診、風(fēng)疹、輪狀病毒、皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒、EB 病毒、腺病毒、腸道病毒、腦炎病毒、黃熱病毒、狂犬病毒和脊髓灰質(zhì)炎病毒等,其敏感性都超過(guò)目前常用的檢查方法。在免疫性疾病方面有試用作自身疫病抗體測(cè)定以及對(duì)過(guò)敏的診斷,例如檢測(cè)各種過(guò)敏原的抗體、DNA 抗體及甲狀腺球蛋白抗體,紅斑性痕瘡抗體等等。在衛(wèi)生學(xué)方面,可用于檢測(cè)食品中葡萄球菌腸毒素及沙門(mén)氏菌毒素等等。 

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢查方法

  • 其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體 ( 聚苯乙烯微量反應(yīng)板 ) 表面,使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行,用洗滌法將液相中的游離成分洗除。
    根據(jù)ELISA所用的固相載體而區(qū)分為三大類(lèi)型:一是采用聚苯乙烯微量板為載體的ELISA,即我們通常所指的ELISA(微量板 ELISA);另一類(lèi)是用硝酸纖維膜為載體的ELISA,稱(chēng)為斑點(diǎn)ELISA(Dot-ELISA);再一類(lèi)是采用疏水性聚脂布作為載體的ELISA,稱(chēng)為布ELISA(C-ELISA)。在微量板ELISA中,又根據(jù)其性質(zhì)不同分為間接ELISA、雙抗體夾心ELISA、雙夾心ELISA、競(jìng)爭(zhēng) ELISA、阻斷ELISA及抗體捕捉ELISA。 

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)注意事項(xiàng)

  • 1. 底物:
    各種酶都有對(duì)底物的特異性,所以使用不同種類(lèi)的酶要求有不同的底物。
    一旦酶結(jié)合物已經(jīng)確定(如 AP或HRP) ,那么可供選擇底物的范圍是很有限的。在這有限底物的范圍內(nèi)如何選擇合適的底物,應(yīng)按下列幾個(gè)條件進(jìn)行選擇: (1)底物在未被酶催化以前應(yīng)該是無(wú)色的,而經(jīng)酶催化后有明顯的顏色變化,這樣可使結(jié)果分辨清楚;(2)所顯色澤易干洗脫;(3)顯色后的產(chǎn)物要求穩(wěn)定,在作定量測(cè)定時(shí)所產(chǎn)生的有色物質(zhì)應(yīng)該是可溶性的;(4)價(jià)廉,易得而且無(wú)毒。因此,對(duì) AP酶結(jié)合物來(lái)講,一般均用硝基苯磷酸鹽,顯色后呈桔黃色,色澤穩(wěn)定,用2mol/LNaOH 終止反應(yīng),可用波長(zhǎng) 403nm測(cè)定O.D值。
    2. 洗滌劑與稀釋劑:
    為了使特異性結(jié)合的抗體量盡可能多,包被微量反應(yīng)板凹孔的抗原應(yīng)該稍微過(guò)量。但在孵育或洗滌過(guò)程中,已吸附的抗原可能有部份會(huì)從固相載體上被洗滌下來(lái)。從而使加入被檢血清中的特異性抗體以外的蛋白質(zhì)很可能會(huì)吸附到原來(lái)包被抗原凹孔的空白處,增加本底顏色,產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng),這是限制 ELISA 特異性的一個(gè)因素,因此不少學(xué)者在稀釋劑及洗滌劑中加入各種保護(hù)性阻劑來(lái)抑制非特異性蛋白的競(jìng)爭(zhēng)性吸附作用。 

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